脂聯(lián)素在肝纖維化發(fā)生機(jī)制中作用的研究

《脂聯(lián)素在肝纖維化發(fā)生機(jī)制中作用的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、j厴交通義訾博士學(xué)位論文脂聯(lián)素在肝纖維化發(fā)生機(jī)制中作用的研究研究生：指導(dǎo)教師：學(xué)科專業(yè)：申請(qǐng)學(xué)位：培養(yǎng)單位：答辯日期：董志霞(0097209089)謝青教授內(nèi)科學(xué)醫(yī)學(xué)博士(科學(xué)學(xué)位)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院2013年05月08日上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士研究生學(xué)位論文脂聯(lián)素在肝纖維化發(fā)生機(jī)制中作用的研究STUDYOFTHEROLEOFADIPONECTININTHEPATHOGENESISOFHEPATICFIBROSIS培養(yǎng)單位：學(xué)科專業(yè)：研究生：指導(dǎo)教師：申請(qǐng)學(xué)位：關(guān)鍵詞：研究方向：答辯日期：

2、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院內(nèi)科學(xué)董志霞謝青教授醫(yī)學(xué)博士(科學(xué)學(xué)位)肝纖維化，肝星狀細(xì)胞，脂聯(lián)素，一氧化氮，一氧化氮合酶肝纖維化發(fā)生機(jī)制2013年05月08日上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文上海交通大學(xué)上海父逋大罕學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承

3、擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：蓬老嘏日期：加B年鄉(xiāng)月7日上海交通大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)上海交通大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密口，在年解密后適用本授權(quán)書。本學(xué)位論文屬于不保密囪。(請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“√”)學(xué)位論文作者簽名：蓬意霰日期：刪弓年上月7日指導(dǎo)教師簽名：彰兩彎日期：

4、細(xì)J弓年／月孑／日上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文脂聯(lián)素在肝纖維化發(fā)生機(jī)制中作用的研究摘要背景與目的肝纖維化是多種慢性肝病共同的病理改變，嚴(yán)重威脅人類的健康。脂聯(lián)素，一個(gè)由脂肪細(xì)胞分泌的激素樣細(xì)胞因子，具有肝保護(hù)和抗肝纖維化的作用，然而脂聯(lián)素抗肝纖維化的作用機(jī)制尚未完全闡明。近年來(lái)研究顯示脂聯(lián)素可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞中一氧化氮合成酶(eNOS)及一氧化氮(NO)產(chǎn)生，在疾病的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要的作用。因此本課題旨在探討脂聯(lián)素是否促進(jìn)肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞(肝星狀細(xì)胞HSCs、枯否細(xì)胞KCs、內(nèi)皮細(xì)胞SECs)中NOS

5、的表達(dá)及NO產(chǎn)生，探討脂聯(lián)素介導(dǎo)的NOS及NO對(duì)HSCs的作用，了解脂聯(lián)素誘導(dǎo)產(chǎn)生的NO在肝纖維化發(fā)生發(fā)展中的作用及其產(chǎn)生的分子機(jī)制。方法細(xì)胞實(shí)驗(yàn)建立體外肝纖維化模型，SD大鼠肝臟原位灌注分離HSCs、KCs和SECs，進(jìn)行體外培養(yǎng)。①予以脂聯(lián)素處理后，RT-PCR檢測(cè)iNOS，eNOS，T】NOSmRNA在三種不同細(xì)胞中的表達(dá)，WesternBlot檢測(cè)烈OS及eNOS蛋白表達(dá)；ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中N02．／N03．的濃度。②細(xì)胞處理后，通過(guò)RT-PCR檢測(cè)CollagenI和a-SMA

6、mRNA的表達(dá)，觀察脂聯(lián)素對(duì)HSCs活化的影響；采用Brdu增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HSCs的增殖；通過(guò)流式細(xì)胞檢測(cè)方法觀察脂聯(lián)素對(duì)HSCs凋亡的影響；利用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)脂聯(lián)素對(duì)HSCs遷移作用的影響。③運(yùn)用Western-Blot檢測(cè)脂聯(lián)素信號(hào)通路中關(guān)鍵信號(hào)分子，篩選出脂聯(lián)素誘導(dǎo)NO產(chǎn)生通過(guò)的關(guān)鍵信號(hào)分子，探討HSCs誘導(dǎo)NO產(chǎn)生的分子機(jī)制。④動(dòng)物實(shí)驗(yàn)建立肝纖維化模型，以四氯化碳(CCL4)500mg&g，一周兩次腹腔注射建立小鼠(野生型小鼠C57BL／6和脂聯(lián)素基因敲除小鼠)肝纖維化模型。肝纖維化造模過(guò)程

7、中同時(shí)予以NOS抑制劑L-NAME(500mg／L水)以及NO供體上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文Molsidomine(120mg／L水)飲水喂養(yǎng)治療，探討NO在肝纖維化中的作用?？涫考祝嚎谀劲僦?lián)素顯著上調(diào)了HSCs和KCs中uNOS基因f分別升高1000和8000倍，P

8、．)的濃度。②脂聯(lián)素抑制了HSCs的增殖(75％，P<0．01)和遷移(40％，P<0．05)，促進(jìn)了其凋亡(90％，P<0．05)。／NOSsiRNA預(yù)處理部分逆轉(zhuǎn)了脂聯(lián)素對(duì)HSCs的增殖、遷移及凋亡的作用(P<0．05)。③信號(hào)通路實(shí)驗(yàn)研究顯示脂聯(lián)素增加了AMPK、ERKl／2以及JNK的磷酸化，誘導(dǎo)了NF．KBIKBa及p-p65的磷酸化，并促進(jìn)了NF．KBp-p65的核轉(zhuǎn)位。④體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與野生型小鼠相比，在CCIA誘導(dǎo)下，脂聯(lián)素基因缺陷的小鼠形成更嚴(yán)重