鋅指核酸酶介導(dǎo)的奶山羊blg基因敲除

鋅指核酸酶介導(dǎo)的奶山羊blg基因敲除

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1、TARGETEDEDITINGOFGO√鑰[’BETA.LACTOGLOBULIN(BLG)GENEWITHMODULAR—ASSEMBLYZINCFINGERNUCLEASESByXiongKaiSupervisor:Prof.ChenJieATHESISSubmittedtoNanjingAgriculturalUniversityInpartialfulfillmentoftheRequirementforMasterDegreeofAgronomyCompletedinJune2013Commencemen

2、tinJune2013原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明:所呈交的學(xué)位論文,是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下,獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外,本論文不包含任何其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體,均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者(需親筆)簽名:蚴wf彈6月丫日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版,允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)

3、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索,可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文。保密口,在——年解密后適用本授權(quán)書。本學(xué)位論文屬于不保密口。(請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“4”)學(xué)位論文作者(需親筆)簽名:墨夠毫%刷¨滁鋤獬:侈沙哆年‘月礦日易,弓年易月r日目錄摘要????????????????????????????????????????????.I彳船ZR彳Cr?????????????????????????????????????????.III縮略詞???????????

4、?????????????????????V引言????????????????????????????????.VII第一章文獻(xiàn)綜述????????????????????????????11山羊爭(zhēng)乳球蛋白與BLG基因研究概況??????????????????????l1.113.乳球蛋白的結(jié)構(gòu)???????????????????????????11.213乳球蛋白的致敏性,對(duì)其傳統(tǒng)的理化消除方法及局限性???????????.21.3BLG基因的結(jié)構(gòu)????????????????????????????2

5、1.4分子育種方法消除B.乳球蛋白影響的嘗試?????????????????32鋅指核酸酶研究概況?????????????????????????????32.1鋅指結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)????????????????????????????..32.2鋅指核酸酶的結(jié)構(gòu)與作用原理??????????????????????.42.3鋅指核酸酶的構(gòu)建過程?????????????????????????.62.4鋅指核酸酶在動(dòng)物基因組修飾中的應(yīng)用??????????????????一93本研究的目的與意義?????????

6、????????????????????9第二章鋅指核酸酶的構(gòu)建與模塊拼裝法的技術(shù)優(yōu)化?????????????111實(shí)驗(yàn)材料??????????????????????????????????1l1.1菌株與質(zhì)粒??????????????????????????????1l1.2實(shí)驗(yàn)試劑???????????????????????????????1l1.3主要儀器及實(shí)驗(yàn)器械??????????????????????????121.4網(wǎng)絡(luò)資源及軟件????????????????????????????122

7、實(shí)驗(yàn)方法?????????????????????????????????一132.1重疊PCR構(gòu)建鋅指模塊????????????????????????一132.2鋅指模塊與非特異性核酸酶的拼裝????????????????????192.3轉(zhuǎn)化???????????????????????????????????????????202.4陽(yáng)性克隆的鑒定????????????????????????????212.5質(zhì)粒提取???????????????????????????????212.6鋅指核酸酶的

8、分子建模模擬???????????????????????223實(shí)驗(yàn)結(jié)果??????????????????????????????????223.1鋅指模塊的設(shè)計(jì)????????????????????????????23目錄3.3鋅指核酸酶的構(gòu)建???????????????????????????273.4鋅指核酸酶的分子建模與打靶效率預(yù)測(cè)??????

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