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《蠟狀芽胞桿菌對芘的生物降解及其降解基因的克隆與表達》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、暨南大學碩士學位論文題名（中英對照）：蠟狀芽胞桿菌對芘的生物降解及其降解基因的克隆與表達BiodegradationofpyrenebyBacilluscereusandcloningandexpressionofdegradinggene作者姓名：衛(wèi)昆指導教師姓名及學位、職稱：尹華博士教授學科、專業(yè)名稱：工學環(huán)境工程學位類型：專業(yè)學位論文提交日期：論文答辯日期：答辯委員會主席：論文評閱人：學位授予單位和日期：獨創(chuàng)性聲明本人A明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成采。除了文中
2、特別加以細注和致謝的地方外.論文屮不包含其他人己經發(fā)農或撰寫過的研究成果，也不包讒為獲得暨南大學或其他教ff'機構的學位或證書而使用過的材料。與我一冋工作的同志對本研究所做的任何貢獻均己在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作名?簽名：簽字H期:年6"卜丨學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解暨南大學W關保留、使用學位論文的規(guī)定，有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被A閱和借閱。本人授權暨南大學可以將學位論文的全部或邰分內容編入有關數(shù)拋昨進行檢索.可以采用影印、縮印
3、或掃描等趙制手段保存、匯編學位論文。(保密的學位論文在解密后適用本授權書）學位論文作者簽名：簽字FI期:V俾（)月攸1~1學位論文作者畢業(yè)后去向：丄作單位：通訊地址：暨南大學碩士學位論文摘要本論文以蠟狀芽胞桿菌（Bacilluscereus）為實驗菌株，對水體中芘的微生物修復進行了研究，考察其對芘的降解性能，分析其代謝產物和相關功能基因及功能酶，以期從分子生物學角度闡明芘在菌體內的降解機理。B.cereus降解芘的最優(yōu)無機鹽培養(yǎng)基濃度為：K-12HPO4100mg·L，KH2PO4100mg·L-1，
4、MgSO-1-14·7H2O20mg·L和檸檬酸鈉100mg·L。在降解體系中加入1mg·L-1Mn2+、0.1mg·L-1Fe3+和10mg·L-1葡萄糖混合物對芘的降解有明顯促進作用；1g·L-1菌體在120h內對2.5μmol·L-1芘的降解率達到61.4%。利用LC-MS/MS分析芘代謝產物，檢測到1-萘酚、2-萘酚、9-羥基菲和1-羥基芘4種單羥基多環(huán)芳烴，表明芘在單加氧酶作用下開環(huán)降解，且B.cereus能有效分解利用4種代謝產物，其最高利用率分別為100%，90.3%，98.3%和52.
5、7%。酶活力分析實驗結果表明，B.cereus具有的水楊酸羥化酶，鄰苯二酚1,2-雙加氧酶和鄰苯二酚2,3-雙加氧酶在芘的降解中起關鍵作用，其酶活力經芘誘導后均有明顯提高。結合產物分析及酶活測定推斷B.cereus對芘的降解途徑以及降解過程是由單加氧酶和雙加氧酶聯(lián)合起作用。通過設計引物，利用PCR擴增技術，從B.cereus的質粒中克隆出鄰苯二酚2,3-雙加氧酶（C23O）基因，對其進行序列測定和分析。該基因全長924bp，具有一個完整開放閱讀框的序列，編碼307個氨基酸氨基酸組成的C23O。理論蛋白
6、分子量為35.16kDa，等電點為5.46。編碼區(qū)G+C含量為61.8%，A+T含量為38.2%。將該C23O基因序列與NCBI數(shù)據(jù)庫中已收錄的其它菌株的C23O基因序列進行比對，分析相關菌屬親緣進化關系，結果顯示B.cereus的C23O基因與假單胞菌屬（Pseudomonas）菌株C23O基因的相似性最高。利用pET32a(+)質粒對C23O基因構建了重組表達載體，成功在表達宿主大腸桿菌BL21(DE3)中進行表達。重組菌株酶活檢測表明，重組蛋白在表達宿主菌中主要以胞內酶的形式存在。關鍵詞：芘；蠟
7、狀芽胞桿菌；代謝產物；鄰苯二酚2,3-雙加氧酶；基因克隆I暨南大學碩士學位論文AbstractThebiodegradationofpyrenebyabaeterialstrain(Bacilluscereus)werestudiedinthisresearch.Thepyrenedegradationmechanismwasexpectedtobeclarifiedfromabiologicalpointofviewviarevealingthebiodegradabilityofpyrene,th
8、ebiologicalcharacteristicsofbacteriaintheprocessofdegradation,andthroughanalyzingthemetabolite,functionalgenesandenzymesinvolvedinthebiodegradation.Theoptimalconcentrationofinorganicsaltmediumwaslistedasfollows:K-1-1-12HPO4100mg·
