鐮形扇頭蜱的幾種先天性免疫相關(guān)mirnas分子研究

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1、密級(jí)：論文編號(hào)：中囯農(nóng)業(yè)科學(xué)院學(xué)位論文鐮形扇頭蜱的幾種先天性免疫相關(guān)miRNAs分子研究IdentificationofMiRNAsRelatedtoInnateImmunityintheRhipicephalushaemaphysaloidesTick碩士研宄生：王方方指導(dǎo)教師：周金林研究員申請(qǐng)學(xué)位類別：獸醫(yī)碩士專業(yè)領(lǐng)域名稱：獸醫(yī)培養(yǎng)單位：上海獸醫(yī)研宄所研宄生院2015年5月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研宄工作及取得的研宄成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研宄成果，也不包含為獲得中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院或其它教育機(jī)

2、構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。研宄生簽名：立時(shí)間：Mi■年<月/曰關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。研宄生簽名:時(shí)間：年/月I曰導(dǎo)師簽名:時(shí)間：年6月■^曰中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文評(píng)閱人、答辯委員會(huì)簽名表鐮形扇頭蜱的幾種先天性免疫相關(guān)miRNAs分子研究論文題目

3、論文作者王方方專業(yè)領(lǐng)域獸醫(yī)研究方向不區(qū)分研究方向指導(dǎo)教師周金林培養(yǎng)單位（研究所、中心）專tjf-%)姓名職稱單位——二!盲評(píng)///'傾等,評(píng)//閱盲評(píng)/人//盲評(píng)//答辯mm教授復(fù)旦大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)參w書主席預(yù)防獸醫(yī)學(xué)朱建國(guó)教授上海交通大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)劉金明研究員上海獸醫(yī)研究所答預(yù)防獸醫(yī)學(xué)陳兆國(guó)研究員上海獸醫(yī)研究所辯預(yù)防獸醫(yī)學(xué)苑純秀副研究員上海獸醫(yī)研究所委員會(huì)議記錄（秘書）顧惠明論文答辯時(shí)間地點(diǎn)2015年5月27日，上海獸醫(yī)研究所Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationIdentificationofMiRNAsR

4、elatedtoInnateImmunityintheRhipicephalushaemaphysaloidesTickM.S.Candidate：FangfangWangSupervisor：Prof.JinlinZhouDegree：MasterofVeterinaryScienceSpecialty:VeterinaryMedicineMay2015摘要蜱是一類專門寄生于脊椎動(dòng)物的體表寄生蟲，是多種疾病的傳播媒介。先天性免疫反應(yīng)是蜱與病原互作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，但迄今為止，對(duì)蜱的先天性免疫反應(yīng)機(jī)制了解甚少。MicroRNA，簡(jiǎn)稱miRNA，是生物體內(nèi)18-25nt的非編碼小RNA，作用于靶

5、基因的3’端非翻譯區(qū)以抑制其表達(dá)或者降解mRNA，在后轉(zhuǎn)錄水平發(fā)揮著生物學(xué)調(diào)控作用，如生長(zhǎng)發(fā)育和先天性免疫等生理學(xué)功能。為了研究蜱的miRNA在先天性免疫反應(yīng)中的作用，本論文在實(shí)驗(yàn)室已有的差異表達(dá)miRNAs數(shù)據(jù)庫(kù)的基礎(chǔ)上，通過(guò)節(jié)肢動(dòng)物的先天性免疫刺激劑——脂多糖（LPS）注射鐮形扇頭蜱，分離鑒定若干蜱的先天性免疫相關(guān)miRNAs分子，為闡明蜱的先天性免疫反應(yīng)機(jī)制提供基礎(chǔ)。本研究結(jié)果包括以下4個(gè)方面：一、通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證了LPS注射后差異表達(dá)（下調(diào)）的5個(gè)miRNAs分子，即miR-184、miR-79-3p、miR-71-5p、miR-1-3p和miR-133-3p，它們的下

6、調(diào)倍數(shù)分別為4.2、3.6、3.4、3.3和5.0。應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄PCR克隆獲得這些miRNAs的前體序列，并且通過(guò)mFold軟件預(yù)測(cè)了這些miRNAs的前體發(fā)夾結(jié)構(gòu)，進(jìn)一步驗(yàn)證了這些miRNAs。二、通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)這五種miRNAs的表達(dá)具有階段特異性和器官特異性的特點(diǎn)，相比較于其它發(fā)育階段和器官，這五種miRNAs均在幼蜱和脂肪體中表達(dá)量是最高的。三、研究了miR-133-3p在蜱吸血前后不同器官的表達(dá)特征，發(fā)現(xiàn)在吸血后蜱的脂肪體、唾液腺和卵巢的表達(dá)量相較于未吸血時(shí)明顯下調(diào)，下調(diào)倍數(shù)分別為13.3、4.2和15.4；盡管實(shí)驗(yàn)組注射miR-133-3pagomirna后，miR

7、-133-3p在半飽血蜱及其脂肪體表達(dá)量明顯增加，但吸血等生物學(xué)性狀并沒(méi)有顯著差異，表明miR-133-3p在蜱吸血中無(wú)重要作用。但是，miR-133-3p在感染有巴貝斯蟲的飽血幼蜱中表達(dá)量顯著下降。四、應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)開(kāi)展了miR-133-3p和miR-79-3p的預(yù)測(cè)靶基因驗(yàn)證。結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-133-3p實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)生的平均相對(duì)熒光活性為0.2，而對(duì)照組為2.5。使用t檢驗(yàn)法分析發(fā)現(xiàn)兩者的相對(duì)熒光活性差異極其顯著，說(shuō)