雞糞便菌耐藥基因及其產(chǎn)esbls大腸桿菌耐藥性的研究

《雞糞便菌耐藥基因及其產(chǎn)esbls大腸桿菌耐藥性的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、中文摘要雞糞便菌群耐藥基因及其產(chǎn)ESBLs大腸桿菌耐藥性的研究抗生素耐藥基因（antibioticresistancegenes，ARGs）是一種新興的污染物，對全球人類健康構(gòu)成潛在威脅。家禽家畜的集約化飼養(yǎng)是造成ARGs不斷增加環(huán)境負(fù)擔(dān)的主要因素。雖然我國畜牧業(yè)大量使用抗生素導(dǎo)致耐藥菌的不斷增加，但對養(yǎng)殖場相關(guān)的ARGs的流行情況仍缺乏本底數(shù)據(jù)。1.雞腸道菌耐藥基因的宏基因組分析本研究利用Illumina高通量測序調(diào)查蛋雞和肉雞腸道菌群中ARGs的多樣性和豐富性。宏基因組數(shù)據(jù)分析表明，在細(xì)菌門水平上，變形菌、硬壁菌、擬桿菌和放線菌在雞腸道菌中占主要優(yōu)勢。在細(xì)菌屬水平上，大腸桿菌的豐

2、度相對較高，并且其中攜帶著大量質(zhì)粒。在兩組菌群中都發(fā)現(xiàn)有編碼抗生素耐藥性的基因。針對ARDB進行BLAST分析進一步揭示，在兩組菌群中共包含195種ARGs，涵蓋了目前已知的主要抗生素耐藥類型。reads分析表明蛋雞和肉雞菌群在耐藥基因的豐富性上存在差異，蛋雞糞便攜帶的ARGs種類顯著高于肉雞糞便。此外，萬古霉素耐藥基因（van）在肉雞糞便菌群中的豐度相對更高。編碼β-內(nèi)酰胺類耐藥基因在雞糞便樣品中的含量相當(dāng)豐富，其中A類β-內(nèi)酰胺酶基因（bl2e_cbla）在肉雞糞便中含量最豐富，但蛋雞糞便中不存在該基因。2．雞源大腸桿菌的抗生素敏感性檢測食品動物攜帶產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBL

3、s）大腸桿菌是人群感染大腸桿菌的潛在來源。本研究分離雞源大腸桿菌，對其耐藥性進行研究。2011年2月-2013年10月，從位于我國黑龍江、遼寧、吉林和江蘇省的20個養(yǎng)雞場以及3個活禽TM市場共分離鑒定195株大腸桿菌。根據(jù)BDPhoenix-100System分析獲得這些菌株表現(xiàn)出對頭孢唑啉、頭孢噻肟、頭孢他啶、頭孢吡肟、氨曲南、氨芐西林、哌拉西林、阿莫西林-克拉維酸、氨芐西林-舒巴坦、亞胺培南、美羅培南、阿米卡星、慶大霉素、復(fù)方新諾明、氯霉素、左氧氟沙星和四環(huán)素的敏感性。最初由TMBDPhoenix-100System初篩ESBL型菌株，進一步由CLSI推薦的頭孢他啶與頭孢他啶加克

4、拉維酸、頭孢噻肟與頭孢噻肟加克拉維酸的雙紙片確證試驗檢測ESBLs。結(jié)果顯示195株大腸桿菌均為ESBL型。抗生素敏感試驗顯示195株大腸桿菌對氨芐西林、哌拉西林和頭孢唑林完全耐藥，而對頭孢噻肟、頭孢吡肟、氨曲南、氨芐西林-舒巴坦、頭孢他啶、阿莫西林-克拉維酸、哌拉西林-他唑巴坦的耐藥菌株分別為97.9%、80.0%、56.4%、34.3%、13.8%、4.1%和1.5%。一些菌株同時對其它抗生素，如四環(huán)素（92.3%）、復(fù)方新諾明（89.7%）、環(huán)丙沙星（80.5%）、氯霉素（76.9%）、左氧氟沙星（72.8%）、慶大霉素（57.2%）和阿米卡星（11.7%）耐藥。195株雞源大

5、腸桿菌都對亞胺培南和美羅培南敏感。此外，96.9%（189/195）產(chǎn)ESBLs大腸桿菌為多重耐藥菌株（multi-drugresistant，MDR）。3．β-內(nèi)酰胺酶基因的檢測本研究檢測并鑒定的β-內(nèi)酰胺類耐藥基因包含blaTEM、blaCTX-M、blaSHV、blaOXA、blaMOX、blaCIT、blaDHA、blaACC、blaEBC和blaFOX。在上述195株雞源大腸桿菌中，有191株至少攜帶一種bla基因，其中有183、121、47、2和1株大腸桿菌中檢測到blaCTX-M、blaTEM-1、blaOXA、blaSHV-5和blaFOX-8基因。本研究首次在我國雞

6、源大腸桿菌中檢測到blaSHV-5。最常見的blaCTX-M為blaCTX-M-15（68株）、blaCTX-M-65（41株）、blaCTX-M-55（35株）、blaCTX-M-14（32株），其次為blaCTX-M-3、blaCTX-M-13、blaCTX-M-79和blaCTX-M-101，以及嵌合基因blaCTX-M-64、blaCTX-M-123和blaCTX-M-132。按地域歸類，在東三省最常見的blaCTX-M基因亞型為blaCTX-M-15（66/145株），在江蘇省最常見的blaCTX-M基因亞型為blaCTX-M-55（25/50株）。在195株產(chǎn)ESBLs大

7、腸桿菌中，有15株（7.7%）同時攜帶CTX-M-1群和CTX-M-9群基因。對blaCTX-M型基因上下游序列分析顯示，198個blaCTX-M中有162個（81.8%，162/198）基因上游存在ISEcp1，與CTX-M-9群基因的間隔區(qū)域為42bp，而與CTX-M-1群基因間隔區(qū)域在45~127bp之間。在多數(shù)CTX-M-1群（90.3%，112/124）和CTX-M-9群（75.7%，56/74）基因的下游檢測到了orf477和IS903。這說明