nrf2-are信號通路在腦缺血后血管新生作用機(jī)制及腦健片干預(yù)研究

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1、分類號：學(xué)校代碼：學(xué)號：級：仏湖南中醫(yī)藥大學(xué)博士學(xué)位論文信號通路在腦缺血后血管新生作用機(jī)制及腦健片干預(yù)研究學(xué)科專業(yè)：中西醫(yī)結(jié)合臨床研究方向：腦血管疾病的防治研究作者姓名：佘顏導(dǎo)師姓名、職稱：祭光先教授學(xué)位類型：科學(xué)學(xué)位中國湖南長沙二零一五年五月原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研宄工作及取得的研究成果。除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研宄成果，也不包含為獲得湖南中醫(yī)藥大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研

2、究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明。作者簽名年月日關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)說明本人了解湖南中醫(yī)藥大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以釆用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文；學(xué)校可根據(jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文。作者簽名導(dǎo)師簽名本研究受到以下課題基金的資助基金名稱：國家重點基礎(chǔ)研宄發(fā)展計劃計劃）項目課題名稱：基于益氣祛瘀生新法調(diào)控腦缺血后神經(jīng)再生的創(chuàng)新藥物研宄課題編號：基金名稱：湖南省中藥粉體與創(chuàng)新藥物省

3、部共建國家重點實驗室培育基地開放基金課題名稱：補(bǔ)陽還五精簡方調(diào)控信號通路對腦缺血后神經(jīng)血管單元作用機(jī)理研宄課題編號：中文摘要目的從體內(nèi)動物實驗、體外細(xì)胞實驗兩方面探討信號通路在腦缺血后血管新生的分子機(jī)制及腦健片的干預(yù)研究。方法（體內(nèi)研究以大鼠為動物模型將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、補(bǔ)陽還五湯組（灌胃：和腦健片組（灌胃：。各組給予相應(yīng)處理后，在第天，第天，第天三個時間點取海馬進(jìn)行檢測，免疫組織化學(xué)法檢測血漿因子相關(guān)抗原（測定微血管密度（。測定腦組織活力（黃漂呤氧化酶法）、含量（疏代巴比妥酸法）、含

4、量（酶標(biāo)法）及活性（比色法）。釆用和法檢測大鼠海馬組織中、、基因及蛋白表達(dá)。（體外研究采用濃度的作用大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞建立體外血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激模型，根據(jù)不同處理分成正常組、模型組、補(bǔ)陽還五湯含藥血清組、腦健片含藥血清組、腦健片含藥血清組、腦健片含藥血清組組，采集細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行檢測，法及流式細(xì)胞術(shù)檢測血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖及調(diào)亡，測定細(xì)胞活力（黃漂呤氧化酶法）、含量（疏代巴比妥酸法）、反含量（酶標(biāo)法）。采用和法檢測大鼠海馬組織中、、基因及蛋白表達(dá)。結(jié)果（動物實驗結(jié)果：假手術(shù)組在微血管只有少量的陽性表達(dá)，

5、模型組陽性表達(dá)微血管在第天時無明顯差異，第天時表達(dá)明顯升高（，隨著動物生存時間延長，模型組陽性表達(dá)呈現(xiàn)下降趨勢。給藥組與模型組表達(dá)規(guī)律基本一致，其中給藥組第天與模型組比較均有顯著差異（，給藥組組間比較差異無顯著性。各個時間點模型組與假手術(shù)組比，腦組織含量、含量、活性明顯降低（，含量升高（各用藥組與模型組比較，其中第天含量、含量、活性與同時間點模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（尸，第天含量、活性與同時間點模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（。結(jié)果顯示：假手術(shù)組、及呈少量表達(dá)，各個時間點模型組表達(dá)略高，但與假手術(shù)組

6、比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（尸，第天模型組HO-1mRNA，第天模型組與同時間點假手術(shù)組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（。各給藥組能不同程度上調(diào)表達(dá)，其巾在第天上調(diào)最明顯與同時段模型組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（。和在第天上調(diào)最明顯，與同時段模型組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（。各時間點各給藥組之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（〉。結(jié)果顯示：蛋白定位于蛋白定位于蛋白定位于內(nèi)參照物定位于，假手術(shù)組中、及蛋白呈少量表達(dá)，模型組蛋白表達(dá)水平第天與假手術(shù)組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義尸，模型組蛋白表達(dá)量升高，第天、第天表達(dá)最明顯，尸。各給藥組能不

7、同程度上調(diào)蛋白表達(dá)，其中在第天及第天上調(diào)最明顯，與同時段模型組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。各給藥組能不同程度上調(diào)蛋白表達(dá)，其中在第天及第天上調(diào)最明顯，與同時段模型組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（尸。各給藥組第天能上調(diào)蛋白表達(dá)，與同時段模型組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（尸。（細(xì)胞實驗結(jié)果：形態(tài)學(xué)、及流式細(xì)胞術(shù)檢測到腦健片含藥血清處理組較腦健片含藥血清處理組和腦健片含藥血清處理組細(xì)胞損傷程度低，抑制凋亡的效果最明顯。與正常組比較，缺氧組，含量明顯降低（尸含量顯著升高與缺氧組比較，各給藥組，含量明顯升高含量顯著降低（

8、尸，三組不同精簡含藥血清組中腦健片含藥血清處理組抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)效果最佳（。及結(jié)果顯示：模型組，，及蛋白表達(dá)較正常組高，而用不同濃度腦健片含藥血清處理后，能不同程度提高，，及蛋白表達(dá)，其中腦健片含藥血清處理組上調(diào)最明顯（。結(jié)論：通路在腦缺血缺氧損傷條件下早期被激活，的高表達(dá)上調(diào)了其下游的，丫水平，提示通路可能參與了腦缺血后內(nèi)源性應(yīng)激防御機(jī)制?！耙鏆忪铕錾隆睘橹蝿t的腦健片能促進(jìn)腦缺血后血管新生，這種對血管保護(hù)作用可能是通過提高抗氧化酶活性，降低脂質(zhì)過氧化程度及激活通路中，，等靶基因