梨褐皮芽變果皮多胺代謝與相關(guān)基因克隆表達(dá)及pbll21-spms轉(zhuǎn)化載體構(gòu)建

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1、Ｓ６６Ｉ．２１；０３６４：碼分類號(hào)單位代２７２００Ｓ０密級(jí)；；學(xué)號(hào)１簽傲乂參．’學(xué)位論文梨褐皮芽變果皮多胺代謝與相關(guān)基因克?。崳姡⒈磉_(dá)及ＰＢ－說ＭＳ轉(zhuǎn)化載體構(gòu)建１１２１Ｃｌｏｎｉｎ客ａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＧｅｎｅｓＲｅｌａｔｅｄｔｏＰｏｌｙａｍｉｎｅｔＭｅｔａｂｏ化ｍｉｎＥｘｏｃａｒｏｆＲｕｓｓｅｔＳｋｉｎｅＭｕｔ；ａｎｔＰｅａｒ；＂ＩＳｐ（巧ｂｒｅｔｓｃｈｎｅｉｄｅｒｉＲｈｅｉｄ．ａｎｄＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅＴｒａｎｓｅｎｉｃ

2、）ｇ＊ＶｅｃｔｏｒＢ－１１２１５ＰＭＳＰ研究生：孫虹麗指導(dǎo)教師；朱立武教授合作指導(dǎo)教師：申請(qǐng)學(xué)位口類級(jí)別：農(nóng)學(xué)碩壬專業(yè)名稱：果樹學(xué)研究方向：果樹種質(zhì)獲源與生物巧術(shù)育種所在學(xué)院：園芝學(xué)院．答辯委員會(huì)主席：二〇—五年六月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加Ｗ標(biāo)注和致謝的地方夕ｈ論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用

3、過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明并表示謝意。簽學(xué)位論文作者簽名：就妃居月字日期：如／Ｊ：年／月ｒ日本學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文作者完全了解安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子文件，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)可Ｗ將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，收錄到《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》，可ｙＡ采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文，向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。（

4、保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書）。＾＾學(xué)位論文作者簽名；林化麻指導(dǎo)教師簽名＇簽＾字日期：年女月５日簽字日期：切／；年女月１日學(xué)工位論文作者畢業(yè)后去向；通作單位：電話：信地址；郵編：摘要梨是一種營養(yǎng)豐富、深受人們喜愛的水果，其果皮色澤作為評(píng)價(jià)果實(shí)商品價(jià)值指標(biāo)之一，向來極受關(guān)注。多胺作為一種重要的植物生長發(fā)育調(diào)節(jié)物質(zhì)，參與植物生長發(fā)育的各個(gè)環(huán)節(jié)，并在植物抗逆性中也發(fā)揮著重要作用。為了探討多胺在‘碭山酥梨’褐皮芽變品系‘銹酥’果皮褐色形成中的作用，試驗(yàn)以‘碭山酥梨’和‘銹酥’花后不同時(shí)期果

5、皮為試材，采用HPLC方法測(cè)定了兩者果皮中多胺含量，運(yùn)用RACE技術(shù)克隆出多胺合成過程中相關(guān)基因，利用Protparam網(wǎng)站對(duì)基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析、通過MEGA5.0軟件分析基因蛋白系統(tǒng)進(jìn)化，并通過Real-timePCR技術(shù)分析其在不同時(shí)期果皮中表達(dá)差異；同時(shí)構(gòu)建了多胺合成過程中SPMS基因的表達(dá)載體。試驗(yàn)獲得主要結(jié)果如下：(1)除花后50d和150d兩個(gè)時(shí)期外，其它時(shí)期‘碭山酥梨’果皮中Put含量均顯著高于‘銹酥’，花后不同時(shí)期‘碭山酥梨’和‘銹酥’果皮中Spd、Spm均呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)。花后75d時(shí)，‘銹酥’果皮中Spd和

6、Spm含量明顯高于‘碭山酥梨’果皮中的含量；Put在花后初期較高，隨后有個(gè)降低升高再降低的過程，在花后75d時(shí)‘碭山酥梨’果皮中Put含量要高于其在‘銹酥’果皮中的含量。(2)以‘銹酥’cDNA為模板，利用RACE技術(shù)獲得ADC、ODC、SPDS、SPMS和SAMS基因核苷酸序列。ADC基因序列全長為2193bp，編碼527個(gè)氨基酸，基因登錄號(hào)為KM923903；ODC基因序列全長為1278bp的全長，編碼305個(gè)氨基酸，基因登錄號(hào)為KP144199；SPMS基因序列全長為1110bp，編碼242個(gè)氨基酸，基因登錄號(hào)為KM923906；

7、SPDS基因序列全長為909bp，編碼221個(gè)氨基酸，基因登錄號(hào)為KM923905；SAMS基因序列全長為1182bp，編碼521個(gè)氨基酸，基因登錄號(hào)為KM923904。預(yù)測(cè)了編碼蛋白的理化性質(zhì)，ADC、SPMS、SAMS三個(gè)蛋白均為水溶性蛋白。ADC、ODC、SPDS、SPMS和SAMS基因的預(yù)測(cè)蛋白與蘋果的親緣關(guān)系最近，同源性分別為91.9%、96.6%、97.3%、90.8%、94.6%。(3)ADC、SPDS、SPMS和ACL5基因在‘碭山酥梨’和‘銹酥’不同時(shí)期果皮中表達(dá)量結(jié)果表明，花后50d時(shí)，多胺合成中相關(guān)基因在‘銹酥’果

8、皮中表達(dá)量明顯高于其在‘碭山酥梨’果皮中的表達(dá)量。ADC、SPDS和SPMS基因表達(dá)量均表現(xiàn)為先增加后降低的趨勢(shì)，該結(jié)果與多胺含量變化趨勢(shì)具有一致性，而ACL5基因變化和其它三個(gè)基因變化趨勢(shì)不同，但在75d