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《棉花黃萎病菌的快速分子檢測(cè)技術(shù)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、密級(jí):論文編號(hào):中囯農(nóng)業(yè)r科學(xué)院學(xué)位論文棉花黃萎病菌的快速分子檢測(cè)技術(shù)研究StudyonRapidMolecularDetectionTechniqueofVerticilliumdahliaeofCotton碩士研宄生.?龐莉指導(dǎo)教師：蔣細(xì)良研宄員申請(qǐng)學(xué)位類別：理學(xué)碩士專業(yè)：微生物學(xué)研宄方向：微生物農(nóng)藥工程培養(yǎng)單位：植物保護(hù)研宄所研宄生院2015年4月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研宄成果，也不包含為獲得中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的
2、材料。與我一同工作的同志對(duì)本研宄所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。研宄生簽名：t莉時(shí)間：j〇t5年彡月二5日關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。研宄生簽名：&$時(shí)間：年3月上日中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文評(píng)閱人、答辯委員會(huì)簽名表論文題目棉花黃萎病菌的快速分子檢測(cè)技術(shù)研宄論文作者龐莉?qū)I(yè)微生物學(xué)研究方向微生物農(nóng)藥工程指導(dǎo)教師蔣細(xì)
3、良培養(yǎng)單位（研宄所、中心）植物保護(hù)研究所姓名職稱單位專業(yè)簽名中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)宋淵教授微生物學(xué)評(píng)與生物技術(shù)學(xué)院中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植生物化學(xué)與分子生物閱楊秀芬研宄員物保護(hù)研究所學(xué)人答辯中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)楊定教授農(nóng)業(yè)昆蟲(chóng)與害蟲(chóng)防治主與生物技術(shù)學(xué)院席中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植邱德文研究員農(nóng)業(yè)微生物學(xué).物保護(hù)研宄所中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植生物化學(xué)與分子生物張杰研宂員物保護(hù)研究所學(xué)答中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研張潤(rùn)志研究員農(nóng)業(yè)昆蟲(chóng)與害蟲(chóng)防治宄所辯中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)草地張英俊教授草業(yè)科學(xué)研宄所委員;會(huì)議記錄（秘書(shū)）1媯論文答辯時(shí)間地點(diǎn)2015.05.19中日樓301會(huì)議室密級(jí)：論文編號(hào)：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院學(xué)位論文棉花黃萎病菌的快速分子檢測(cè)技術(shù)研究
4、StudyonRapidMolecularDetectionTechniqueofVerticilliumdahliaeofCotton碩士研究生：龐莉指導(dǎo)教師：蔣細(xì)良研究員申請(qǐng)學(xué)位類別：理學(xué)碩士專業(yè)：微生物學(xué)研究方向：微生物農(nóng)藥工程培養(yǎng)單位：植物保護(hù)研究所研究生院2015年4月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationStudyonRapidMolecularDetectionTechniqueofVerticilliumdahliaeofCottonM.S.Candidate：LiPangSupervisor
5、：ProfessorXiliangJiangMajor：MicrobiologySpecialty:MicrobialPesticideEngineeringApril2015摘要棉花黃萎?。╟ottonverticilliumwilt）主要是由大麗輪枝菌（Verticilliumdahliae）侵染引起的，是一種嚴(yán)重危害棉花生產(chǎn)的世界性土傳真菌病害。該病菌可以在土壤中存活多年，成為翌年棉花病害的重要侵染源。因此，快速及時(shí)地檢測(cè)出棉花黃萎病菌，對(duì)棉花黃萎病的早期監(jiān)控預(yù)警及后期防治具有重要意義。土壤是棉花黃萎病菌生存的主要場(chǎng)所，但是由于土壤中存在著種類繁多且不計(jì)其數(shù)的微生物，從土壤中直接分
6、離得到病原菌十分困難；另一方面，由于土壤中腐植物質(zhì)等抑制因子的存在，直接從土壤中提取病原菌DNA也比較困難。本研究改進(jìn)了土壤中棉花黃萎病菌的DNA提取方法，并運(yùn)用巢氏PCR技術(shù)，建立了土壤中棉花黃萎病菌的快速分子檢測(cè)體系，具有高度的特異性和靈敏性，為建立基于微流控PCR技術(shù)的棉花黃萎病的快速檢測(cè)技術(shù)奠定基礎(chǔ)。論文主要研究結(jié)果如下：1、設(shè)計(jì)了棉花黃萎病菌的特異性引物VDS-F/VDS-R，通過(guò)反應(yīng)條件優(yōu)化，建立了棉花黃萎病菌的常規(guī)PCR檢測(cè)體系，特異性擴(kuò)增產(chǎn)物大小約520bp，檢測(cè)靈敏度達(dá)到10pg級(jí)。該體系檢測(cè)特異性強(qiáng)，可以準(zhǔn)確檢測(cè)棉花黃萎病菌的三種不同菌株VD、V991、V250，還可
7、以特異性地從含有棉花黃萎病菌的土壤及棉花植株組織中檢測(cè)到病原菌。2、分析比較了5種土壤基因組的提取方法，建立了液氮研磨-試劑盒方法提取土壤棉花黃萎病菌DNA的標(biāo)準(zhǔn)程序。利用此方法提取的土壤棉花黃萎病菌基因組DNA質(zhì)量較高，可以滿足后續(xù)PCR擴(kuò)增的要求。3、建立了土壤中檢測(cè)棉花黃萎病菌的巢氏PCR檢測(cè)技術(shù)。巢氏PCR第一輪引物為ITS1/ITS4，第二輪引物為VDS-F/VDS-R。利用改進(jìn)的土壤提取方法提取帶菌土壤的總DNA，該巢氏
