茶樹(shù)倍性鑒定體系的建立

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1、：Ｓ５７．１單位代碼；０３６４分類號(hào)１１１密級(jí)：學(xué)號(hào)：２７２０２７９簽後雇茲丈ｆ碩±學(xué)位論文茶樹(shù)倍性鑒定體系的建立ＰｌｏｉｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎＳｙｓ化ｍｏｆＣ口ｗｅ／／／０沉ｎｅ巧別Ｓｙ研究生；李瑞琳指導(dǎo)教?zhēng)煟海壨饡源航淌冢崳姾献髦笇?dǎo)教少巧：孫俊教按申請(qǐng)學(xué)位口類級(jí)別：農(nóng)學(xué)碩ｄｒ專業(yè)名稱；茶學(xué)研究方向：茶葉生物化學(xué)與天然產(chǎn)物開(kāi)發(fā)所在學(xué)院：茶與食品科技學(xué)院答辯委員會(huì)主席；二〇—五年六月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人

2、盧明所Ｍ義的論義是巧個(gè)人甘師巧計(jì)Ｋ進(jìn)枉的硏究Ｋ作及取得的側(cè)？｜｜究化火，特別加Ｗ標(biāo)注和致謝的地為，。Ｍ我所知餘了文｜外論義中不包含化他＇人。經(jīng)發(fā)巧或撰弓過(guò)的研究成巧，也不包含為獲得安徽化化大學(xué)或教巧機(jī)構(gòu)一的學(xué)位或證書而化Ｗ過(guò)的材料。４我Ｎ工作的巧志鐘本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。研巧化簽名：ｙｆ荷辦時(shí)間：公中月／關(guān)于論文使用授權(quán)的說(shuō)明本人充全了解安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校巧權(quán)，保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱可Ｗ

3、采用影印、縮印或、匯編學(xué)位論文＾１掃描巧復(fù)制手段保存。同意安微農(nóng)業(yè)火學(xué)可｜＾用不同義式在不同媒體上發(fā)巧、傳播學(xué)位論文的全部或遵部分內(nèi)容。（保密的研學(xué)位論文在解密后應(yīng)守此憤議）究生簽名：時(shí)間：／Ｔ年＾口／Ｊ？曰？？第導(dǎo)師簽名時(shí)間：年ｔＴ月／ＪＴ摘要本文初步研究了茶樹(shù)花藥培養(yǎng)的方法，建立了基于FISH技術(shù)的茶樹(shù)倍性檢測(cè)體系及流式細(xì)胞技術(shù)的基因組DNA含量測(cè)定方法，具體研究成果如下：茶樹(shù)花藥培養(yǎng)在本實(shí)驗(yàn)室前期花藥培養(yǎng)工作基礎(chǔ)上，進(jìn)一步優(yōu)化培養(yǎng)基，以“舒茶早”、“福云6號(hào)”為試材，研究了不同濃度

4、肌醇對(duì)花藥培養(yǎng)的影響。結(jié)果表明，過(guò)量肌醇促進(jìn)愈傷組織大量形成，不利于茶樹(shù)花藥培養(yǎng)。本研究得到了花藥粒膨大，無(wú)愈傷形成的花藥離體培養(yǎng)試材，為進(jìn)一步誘導(dǎo)其內(nèi)花粉再生成器官或組織提供了試材。茶樹(shù)染色體制片以“舒茶早”為試材，建立了一套基于茶樹(shù)無(wú)性系根尖的簡(jiǎn)單、高效的染色體制片技術(shù)：上午10點(diǎn)左右取茶樹(shù)根尖，通過(guò)8-羥基喹啉4℃冰箱下預(yù)處理4小時(shí)，用卡諾氏溶液4℃冰箱中固定4小時(shí)，然后放在1mol/L的鹽酸解離5min，苯酚品紅染色10min后敲片、壓片，顯微鏡觀察。原位雜交以熒光標(biāo)記的小麥45SrDNA為探針，獲得了“舒茶早

5、”根尖原位雜交圖上的6個(gè)（3對(duì)）信號(hào)點(diǎn)，由此推斷“舒茶早”是二倍體品種。DNA含量的測(cè)定從DNA含量已知的雞血紅細(xì)胞、玉米、大豆中篩選出適合茶樹(shù)DNA含量測(cè)定的內(nèi)參—大豆，以大豆（品種Polanka2C=2.5pg）為內(nèi)參，測(cè)得包括“舒茶早”、“白毫早”、“龍井43”、“特香早”、“福鼎大白茶”、“谷雨香”等十幾種茶樹(shù)品種的DNA含量。以“龍井43”為參照，對(duì)“舒茶早”、“白毫早”、“福云6號(hào)”，“政和大白茶”、“杭州大葉”以及“上浮洲”愈傷組織的倍性進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明，“舒茶早”、“白毫早”、“福云6號(hào)”為二倍體，

6、“政和大白茶”、“杭州大葉”為三倍體，“上浮洲”愈傷組織為四倍體。茶樹(shù)不同組織DNA含量的測(cè)定以“舒茶早”為試材，流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果表明其花瓣、嫩葉以及花絲的DNA相對(duì)含量略有不同，但都可以作為倍性鑒定的試材，相對(duì)于幼葉，花瓣、花絲因次生代謝產(chǎn)物干擾較少，更適于流式細(xì)胞檢測(cè)。低溫脅迫對(duì)流式細(xì)胞測(cè)定結(jié)果的影響以“舒茶早”為試材，將葉片置于4℃冰箱中分別處理2h、4h、8h、12h、24h，結(jié)果表明隨著低溫處理時(shí)間延長(zhǎng)，各處理DNA含量不斷降低，說(shuō)明低溫脅迫處理影響流式細(xì)胞DNA含量測(cè)定結(jié)果。III將低溫處理12h的“舒茶早

7、”葉片置入25℃恒溫箱內(nèi)分別放置2h、4h、8h、12h和24h后，測(cè)定各樣品DNA含量，結(jié)果表明25℃恒溫處理12h后，“舒茶早”葉片的相對(duì)DNA含量基本恢復(fù)正常。關(guān)鍵詞：花藥培養(yǎng)，舒茶早，倍性鑒定，DNA含量測(cè)定IVAbstractInthisarticle，weexploredanthercultureofCamelliaSinensis，establishedthewayofploidyidentificationbasingonFISHandestimatedDNAvariationamongTeaspeci

8、es.Mainconclusionswereasfollows:1.AnthercultureofCamelliaSinensis.Inthisstudy,‘shuchazao’and‘longjing-43’wereusedtoinvestigateinfluenceofdifferentfactorswithN6basalme