一株降解熒蒽的銅綠假單胞菌的分離篩選及其降解特性研究

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1、分類號(hào)：Ｑ９３學(xué)校代碼：１０６９７密級(jí)公開(kāi)學(xué)號(hào)：２０１２２０８５１ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ士學(xué)位論文ＭＡＳＴ＇ＥＲＳＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ一株降解焚慧的銅綠個(gè)＾單胞菌的分離歸選及其降解特性研究學(xué)科名稱：微生物學(xué)作者：路薇指導(dǎo)老師：馬艷玲副教授西北大學(xué)學(xué)位評(píng)定委員會(huì)二〇一五年西北大學(xué)學(xué)位論文知識(shí)產(chǎn)權(quán)聲明書(shū)本人完全了解西北大學(xué)關(guān)于收集、保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定。學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版。本人允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)西北大學(xué)可以將本學(xué)位論文的

2、全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所等機(jī)構(gòu)將本學(xué)位論文收錄到《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》或其它相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)。保密論文待解密后適用本聲明。於學(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：系》＿〖ｎ日ｙ年／月丨日廣年／月西北大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明：所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，本論文不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得西北大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的

3、學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料一。與我同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝Ｊ思、０學(xué)位論文作者簽名：年／月Ｍ日一株降解焚恵的銅綠假單胞菌的分離蹄選及其降解特性研究中文摘要ｅｃｕｌａｒｗｅｉｈｔ－ｏｌｃｃ焚蔥是高分子量多環(huán)芳烴（Ｈｉｇｈｍｏｌｇｐｙｙｌｉｃａｒｏｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｓ，ＨＭＷＰＡＨ一ｓ）的代表之，，廣泛分布在環(huán)境中也是石油污染土壤中的主要ＨＭＷＰＡＨｓ。由于焚蒽疏水性強(qiáng)，，在環(huán)境中穩(wěn)定性高并且對(duì)人體具有致癌的潛在威脅，尋求有效的治理方法將一其從環(huán)境中消除便成

4、為當(dāng)前的項(xiàng)重要任務(wù)。在已有的諸多治理方法中，傳統(tǒng)的理化方法難以將其徹底分解，、成本低和環(huán)境友好的特點(diǎn)，日益受到廣泛關(guān)注而微生物降解法因高效率。一一本研究對(duì)石油污染土樣以突蒽進(jìn)行富集培養(yǎng)，分離得到株能夠以焚蔥為唯碳源和能源生長(zhǎng)良好的菌株，命名為ＤＮ１。通過(guò)觀察菌落形態(tài)、測(cè)定其生理生化特征并進(jìn)行１６ＳｒＲＮＡ基因系統(tǒng)發(fā)育分析，初步鑒定該菌株為銅綠假單胞菌（ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｉｎｏｓａ）。測(cè)定其最＾Ｐｇ°°３４Ｃ？３７Ｃ５５？７５ＤＮ１在ＢＰＬＭ培養(yǎng)７適生長(zhǎng)溫度為，最適生長(zhǎng)ｐＨ為．．?；鶅?nèi)搖瓶培養(yǎng)，２２一天內(nèi)鼠李糖脂最高產(chǎn)量可達(dá)

5、．９／Ｌ，具有良好的產(chǎn)鼠李糖脂能力，這特性有利于熒蔥的ｇ增溶、乳化進(jìn)而促進(jìn)其生物降解。測(cè)定ＤＮ１對(duì)熒蔥的降解能力，０．５ｇ／Ｌ熒蒽１４天內(nèi)的降解一率可達(dá)到９０．２％，氣相色譜檢測(cè)顯示熒惠幾乎完全被降解。對(duì)ＰＡＨｓ降解的關(guān)鍵酶鄰苯二酉分－Ｃ１２０）和二２３－１，２雙加氧酶（鄰苯酷，雙加氧酶Ｃ２３０）進(jìn)行檢測(cè)，ＰＣＲ驗(yàn)證基因并測(cè)（定在０．２ｇ／Ｌ熒惠中生長(zhǎng)的活性變化，發(fā)現(xiàn)兩種酶的活性均在誘導(dǎo)２４ｈ之后顯著升高，且在４８ｈ后顯著降低。比較兩酶活性，發(fā)現(xiàn)Ｃ１２０顯著高于Ｃ２３０，表明其在熒惠生物降解的限速反應(yīng)中起主導(dǎo)作用。采用隨機(jī)轉(zhuǎn)座突變技

6、術(shù)構(gòu)建ＤＮ１的轉(zhuǎn)座突變體庫(kù)１２０００余株，并蹄選到與焚惠降解相關(guān)的缺陷型突變株１１株。通過(guò)隨機(jī)ＰＣＲ擴(kuò)增突變株中轉(zhuǎn)座子插入位點(diǎn)鄰近序列，測(cè)序比對(duì)知曉與降解焚蒽相關(guān)的基因，已知曉的有：海藻酸鹽合成蛋白Ｆｅｉｎ枸；據(jù)酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ＦｅｃＡ轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)蛋白；色氨酸合成酶ａ亞基以及阿糖胞苷ｃｔｏｓｉｎｅａｒａｂｉｎｏｓｉｄｅ；（ｙ，ＡｒａＣ）轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子。ＤＮ一１綜上所述，，，，是株可以高效降解焚蒽的銅綠假單胞菌生長(zhǎng)條件寬松易于培養(yǎng)其良好的降解性能與其優(yōu)良的產(chǎn)鼠李糖脂能力密切相關(guān)。在菌株ＤＮ１降解熒蒽的過(guò)程中，雙加氧酶Ｃ１２０和Ｃ２３０經(jīng)誘導(dǎo)后活性

7、雙雙升高，且Ｃ１２０起主要作用。目前已通過(guò)轉(zhuǎn)座突一變獲得與焚蒽降解相關(guān)的基因，但對(duì)于其作用機(jī)制還有待進(jìn)步研究。關(guān)鍵詞：銅綠假單胞菌；鼠李糖脂；熒惠；雙加氧酶；生物降解ＩＳｔｕｄｙｏｎｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａｓｔｒａｉｎＤＮｌｆｏｒｆｌｕｏｒａｎｔｈｅｎｅｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎＡｂｓｔｒａｃｔＦｈｔｔｔｔｌｕｏｒａｎｔｅｎｅｉｓａｍｅｍｂｅｒｏｆｒｅｐｒｅｓｅｎａｉｖｅｈｉｇｈｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇ

8、ｈｐｏｌｙｃｙｃｌｉｃａｒｏｍａｉ