玉米多葉突變體lfy1的遺傳分析、精細(xì)定位和克隆

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1、分類號：單位代碼：密級學(xué)號：博士學(xué)位論文玉米多葉突變體砂的遺傳分析、精細(xì)定位和克隆研究生杜雪梅指導(dǎo)教師王建華教授申請學(xué)位門類級別農(nóng)學(xué)博士專業(yè)名稱禾中〒禾斗宇支研究方向玉米分子生物學(xué)所在學(xué)院農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院年月獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研宄工作及取得的研宄成果。盡我所知，除了文中已經(jīng)注明引用和致謝的內(nèi)容外，論文中不包含本人和其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中國農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研宄所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明

2、并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名：和時間：年月曰關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的說明本人完全了解中國農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定。本人同意中國農(nóng)業(yè)大學(xué)有權(quán)保存及向國家有關(guān)部門和機(jī)構(gòu)送交論文的紙質(zhì)版和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人同意中國農(nóng)業(yè)大學(xué)將本學(xué)位論文的全部或部內(nèi)容授權(quán)匯編錄入《中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》或《中國優(yōu)秀碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》進(jìn)行出版，并享受相關(guān)權(quán)益。保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議）學(xué)位論文作者簽名：時間：年月房日本研究由科技部“”項目玉米產(chǎn)量和品質(zhì)性狀全基因組選擇育種體系的建立和應(yīng)用資助摘要玉米砂

3、突變體主要表型為穗上多葉，其不僅是研宄玉米莖尖生長點發(fā)育機(jī)制的重要突變體，也是飼用玉米育種的重要種質(zhì)。前人將砂基因初定位在號染色體長臂上，但至今仍未克隆。在本研宄中，我們進(jìn)一步證實砂突變體在其后代分離群體中的表型受遺傳背景影響明顯。利用砂突變體與不同自交系構(gòu)建的遺傳群體，我們通過圖位克隆法對其精細(xì)定位，構(gòu)建物理圖譜，且找到其他影響該表型的位點。此外，利用自然群體對玉米穗上葉數(shù)和荀葉數(shù)進(jìn)行了全基因組關(guān)聯(lián)分析。主要結(jié)果如下：突變體并不是典型的顯性突變體，受遺傳背景影響明顯。在與得到的分離群體中，穗上葉數(shù)分布呈現(xiàn)典型的質(zhì)量性狀分

4、離比，在與鄭得到的分離群體中，穗上葉數(shù)呈現(xiàn)典型的數(shù)量性狀遺傳分布。因此，選擇群體作為精細(xì)定位的遺傳群體，通過開發(fā)和分子標(biāo)記，將砂基因的候選區(qū)間縮小至參照基因組。三個標(biāo)記與砂基因共分離，利用其鑒定基因型，觀察到砂突變體莖尖生長點發(fā)育受到嚴(yán)重抑制。根據(jù)參考基因組，對候選區(qū)間內(nèi)和兩個候選基因進(jìn)行了序列測定、轉(zhuǎn)錄和蛋白水平分析?；蛟谕蛔凅w與之間有差異，但是與鄭等自交系完全一致，且表達(dá)量未檢測到明顯差異。突變體中，基因第八內(nèi)含子有一轉(zhuǎn)座子插入，但并未影響該基因轉(zhuǎn)錄長度，轉(zhuǎn)基因株系并未出現(xiàn)多葉表型。說明和可能并不是突變體的候選基因。

5、；通過構(gòu)建蹄選砂突變體文庫，鄭文庫，得到候選區(qū)域物理圖譜。突變體文庫中，個陽性克隆可覆蓋整個候選區(qū)域。對其中一個陽性克隆測序證實在突變體中，候選區(qū)域長度至少大于。鄭文庫中對的一個陽性克隆進(jìn)行測序，獲得約序列，其序列與有的重疊區(qū)域，且序列完全一致。說明鄭與突變體的基因組序列更為接近，兩者之間序列的差異之處才可能是真正的突變位點。突變體與鄭構(gòu)建的分離群體穗上葉數(shù)呈現(xiàn)正態(tài)分布，符合數(shù)量性狀遺傳規(guī)律。利用個標(biāo)記，突變體與鄭的群體個單株，對穗上葉數(shù)進(jìn)行定也，共定位到個影響穗上葉數(shù)的位點，其中基因所在的位點貢獻(xiàn)率最高，’為貢獻(xiàn)率次之，

6、為通過對、群體的基因型和表型分析進(jìn)一步驗證和兩個位點。且證實與標(biāo)記緊密連鎖’與標(biāo)記緊密連鎖。連續(xù)兩年統(tǒng)計個自交系組成的關(guān)聯(lián)分析群體的穗上葉數(shù)和苞葉數(shù)，數(shù)據(jù)分析表明，穗上葉數(shù)和苞葉數(shù)相關(guān)系數(shù)為。對穗上葉數(shù)進(jìn)行全基因組關(guān)聯(lián)分析，以值為顯著性標(biāo)準(zhǔn)，共檢測到個顯著性位點。玉米苞葉數(shù)的全基因組關(guān)聯(lián)分析，顯著性標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置為值共有個顯著性位點被檢測到。關(guān)鍵詞：穗上葉數(shù)圖位克隆分子標(biāo)記候選基因AbstractLeafy(Ifyl)isadominantmutantinmaizethathasbeenshowntoparticularlyin

7、creasedleafnumberabovetheear.Ithasbeenstudiednotonlyforfloraltransitionmechanismsofthemaizebutalsoasanimportantgermplasmforsilageproductioninmaize.TheIfyllocuswasreportedtobelocatedonthelongarmofchromosome3，，，，，，29E3BACcloneshowssignificantdiferencefromB73referenc

8、egenomeandgivesalongersequence(>90kb)byblastontoB73genomesequence.Furthermore,ApositiveFosmidclone(26D6)forGRMZM2G072080whichdetectedformzheng58Fosmidli