資源描述：
《象耳豆根結(jié)線蟲侵染能力測定及土壤宏基因組文庫殺線蟲活性克隆篩選》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、學(xué)校代碼：學(xué)號：分類號：密級治去大營碩士學(xué)位論文題目象耳豆根結(jié)線蟲侵染能力測定及土壤宏基因組文庫殺線蟲活性克隆篩選作者張懷軍指導(dǎo)教師陳綿才研究員專業(yè)植物病理學(xué)時間〇一五年五月象耳豆根結(jié)線蟲侵染能力測定及土壤宏基因組文庫殺線蟲活性克隆篩選海南大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明和使用授權(quán)說明原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品或成果。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均己在文中以明確方
2、式標(biāo)明。本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。論文作者簽名：曰期：宇玄月邛曰學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)說明本人完全了解海南大學(xué)關(guān)于收集、保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。學(xué)?？梢詾榇嬖陴^際合作關(guān)系兄弟高校用戶提供文獻(xiàn)傳遞服務(wù)和交換服務(wù)。本人授權(quán)海南大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密論文在解密后遵守此規(guī)定。本人已經(jīng)認(rèn)真閱讀“髙校學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫發(fā)布章程”，同意將
3、本人的學(xué)位論文提交“高校學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫”中全文發(fā)布，并可按“章程”中規(guī)定享受相關(guān)權(quán)益。同意論文提交后滯后：□半年；□一年：二年發(fā)布。論文作者簽名：碟、日期：年月日海南大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要近年來，象耳豆根結(jié)線蟲在熱帶和亞熱帶地區(qū)番石榴園中大規(guī)模爆發(fā)，給番石榴造成毀滅性的危害和經(jīng)濟損失，己逐漸上升為熱帶和亞熱帶地區(qū)最重要的根結(jié)線蟲種類之一。隨著現(xiàn)代高效農(nóng)業(yè)的發(fā)展，日益增加的溫室與設(shè)施大棚導(dǎo)致地溫不斷提高，使象耳豆根結(jié)線蟲的入侵與擴散成為可能這將給全國的農(nóng)作物生產(chǎn)帶來威脅。因而，弄清其寄主范圍和侵染力強弱，并
4、找出高效的防治方法是防止該病害蔓延的關(guān)鍵。通過海南島各類寄主植物根結(jié)線蟲種類鑒定，發(fā)現(xiàn)象耳豆根結(jié)線蟲種群已進一步擴散，取代南方根結(jié)線蟲，而成為我國熱帶亞熱帶地區(qū)根結(jié)線蟲優(yōu)勢種群。為了避免化學(xué)殺線蟲劑施用對環(huán)境的污染，本研究運用宏基因組技術(shù)，直接從與該線蟲發(fā)生和防控關(guān)系最為密切的根圍微生物中篩選殺線蟲蛋白酶基因資源，并對其酶的活性做了初步研究，旨在為象耳豆根結(jié)線蟲的生物防治開辟一條新的途徑。具體研究結(jié)果如下：象耳豆根結(jié)線蟲侵染測定。通過溫室大棚盆栽番茄，探討了象耳豆根結(jié)線蟲最低接種量，以及接種量對個番茄品種侵
5、染差異及生長的影響。研究的結(jié)果表明，象耳豆根結(jié)線蟲對番茄最低侵染起始濃度為條。個番茄品種中，“阿姆斯丹”中抗品種，“中雜號”、“利生一號”、“西粉一號”、“大安吉日”抗病品種；“美國”、“金圣”為感病品種。宏基因組文庫構(gòu)建和篩選。從受象耳豆根結(jié)線蟲嚴(yán)重侵染的番石榴園中，健康番石榴根圍取樣，經(jīng)總提取、純化、末端修復(fù)、連接、包裝和轉(zhuǎn)染等過程，構(gòu)建宏基因組表達(dá)文庫。特征分析結(jié)果表明：該文庫庫容個克隆，平均插入片段，空載率，包含超過的微生物基因組信息。同時，以脫脂奶為底物，經(jīng)透明圈表型選擇，篩選出含蛋白酶陽性克隆子
6、株，其中株對象耳豆根結(jié)線蟲具有較強毒殺作用，包括、、、、、、、和，尤以克隆對線蟲的毒殺效果最好。含蛋白酶基因克隆子活性探索。以克隆子為研究對象，搖床轉(zhuǎn)數(shù)培養(yǎng)溫度°是最佳活化條件；搖床轉(zhuǎn)速，培養(yǎng)溫度為°時，是克隆菌最適產(chǎn)酶活最佳條件；加入誘導(dǎo)物脫脂奶、誘導(dǎo)劑雙重作用下，時，發(fā)酵液蛋白吸收值達(dá)到最大值。蛋白酶克隆子的初步研究，為蛋白酶基因片段亞克隆、測序、活性蛋白酶分離純化奠定了基礎(chǔ)。對構(gòu)建和篩選出亞克?。?。通過對基因結(jié)構(gòu)進行了初步分析發(fā)現(xiàn)：是一種分泌型胞外蛋白酶，與來自于—的絲氨酸蛋白酶僅有的同源性，有其保守
7、的催化三元組：，和。殺線蟲室內(nèi)生物測定實驗表明：克隆發(fā)酵液在無需誘導(dǎo)劑，無需克隆載體上的啟動子，就能起到殺線蟲的作用。說明該蛋白酶基因有獨立的啟動子，同時，也說明該蛋白酶是一種分泌型胞外絲氨酸蛋白酶。象耳豆根結(jié)線蟲侵染能力測定及土壤宏基因組文庫殺線蟲活性克隆蹄選關(guān)鍵詞：象耳豆根結(jié)線蟲；二齡幼蟲；接種數(shù)量；基因組文庫；活性蛋白酶海南大學(xué)碩士學(xué)位論文，，，，“”、“”、“，“”“，，象耳豆根結(jié)線蟲侵染能力測定及土壤宏基因組文庫殺線蟲活性克隆篩選、、、、、、°。，汪，—：；；；海南大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄弓目根結(jié)線蟲
8、危害與防治根結(jié)線蟲危害分布生物防治研究進展角質(zhì)蛋白酶在防治根結(jié)線蟲方面的可行性角質(zhì)蛋白酶產(chǎn)生菌及其酶基因研究角質(zhì)蛋白酶研究的可行性角質(zhì)蛋白酶產(chǎn)生菌的分類角質(zhì)蛋白酶結(jié)構(gòu)特征以及降解機理實驗室角質(zhì)蛋白酶產(chǎn)生菌發(fā)酵酶活比較基于土壤宏基因組文庫的角質(zhì)蛋白酶基因挖掘土壤宏基因組文庫活性物質(zhì)篩選角質(zhì)酶產(chǎn)生菌在植物病害防治方面的可行性分析。角質(zhì)酶降解菌在生防應(yīng)用中可能存在的問題和擬解決方案角質(zhì)蛋白酶產(chǎn)生菌對植物病害防治展望角質(zhì)
