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《滑膜間充質(zhì)干細胞與骨髓間充質(zhì)干細胞分化潛能的體外研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、中文摘要干細胞（mesenchymalstemcells，MSCs）是一類具有自我更新能力和多向分化潛能的細胞，可作為種子細胞應(yīng)用于組織工程的研究中。骨髓間充質(zhì)干細胞（bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs）往往應(yīng)用于骨組織的修復(fù)實驗中，而滑膜間充質(zhì)干細胞（synovium-derivedmesenchymalstemcells，SMSCs）近些年來也被廣泛研究，作為干細胞家族的新成員，以其高度的成軟骨分化能力成為軟骨缺損修復(fù)的熱點。因此,探討如何利用兩種干細胞的分化潛
2、能在組織工程中發(fā)揮最優(yōu)作用具有重要的臨床意義。實驗?zāi)康模后w外分離BMSCs和SMSCs，進行成骨和成軟骨誘導(dǎo)，通過染色的方法驗證SMSCs的多向分化能力，并且通過PCR定量分析BMSCs和SMSCs的成骨和成軟骨基因的表達水平，比較二者成骨和成軟骨分化能力的強弱，為組織工程中種子細胞的選擇提供依據(jù)。實驗方法：本實驗取新西蘭白兔，4周齡，雌雄不限，均重約為1Kg，分離兔股骨，采取全骨髓培養(yǎng)法在體外提取BMSCs，分離膝關(guān)節(jié)滑膜組織，應(yīng)用酶消化法提取SMSCs，進行貼壁培養(yǎng)。在傳代培養(yǎng)過程中觀察BMSCs和
3、SMSCs的細胞形態(tài)及生長速度。實驗均采用第3代干細胞，分為成骨誘導(dǎo)組和成軟骨誘導(dǎo)組。成骨誘導(dǎo)為6孔板平面誘導(dǎo)，加入成骨誘導(dǎo)液（地塞米松、抗壞血酸鹽、β-甘油磷酸鈉、胎牛血清、基礎(chǔ)培養(yǎng)液）誘導(dǎo)14天。成軟骨誘導(dǎo)為微球誘導(dǎo)，先制作干細胞微球，培養(yǎng)液培養(yǎng)3天后換成軟骨誘導(dǎo)液（地塞米松、ITS、羥基脯氨酸、TGF-β3、抗壞血酸鹽、基礎(chǔ)培養(yǎng)液），誘導(dǎo)14天。SMSCs進行成脂誘導(dǎo)（吲哚美辛、異丁基-1-甲基黃嘌呤、地塞米松、ITS、FBS、基礎(chǔ)培養(yǎng)液）7天。誘導(dǎo)完成后，進行茜素紅染色檢測成骨分化，油紅O染色檢
4、測成脂分化，阿利新藍染色和免疫組化染色檢測成軟骨分化，并進行RT-PCR對成骨和成軟骨相關(guān)基因的表達水平進行檢測，進行統(tǒng)計學(xué)分析，比較BMSCs和SMSCs的成骨和成軟骨能力。I實驗結(jié)果：1.原代BMSCs為梭形或多邊形，呈“漩渦樣”排列，起初生長速度較慢，7天左右達到80%融合；原代SMSCs呈梭形，更類似于纖維形態(tài)，排列密集，并呈“魚群樣”排列，生長速度快，5天左右可達80%融合，可傳代至第10代，仍未見明顯細胞衰老表現(xiàn)，傳代培養(yǎng)過程中細胞生長速度和傳代速度明顯大于BMSCs。2.在茜素紅染色結(jié)果中
5、，SMSCs成骨分化組可見紅色鈣結(jié)節(jié)晶體，SMSCs成軟骨分化組通過免疫組化染色可證明有Ⅱ型膠原、Ⅹ型膠原和糖胺聚糖存在。另外，油紅O染色結(jié)果中可以觀察到SMSCs成脂分化組有脂滴沉積。以上結(jié)果證明SMSCs具有多向分化潛能。3.通過RT-PCR檢測兩種干細胞成骨和成軟骨相關(guān)基因的表達水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)BMSCs成骨組的Ⅰ型膠原、骨鈣素和Runx-2的表達水平高于SMSCs成骨分化組（P＜0.05），而SMSCs的Ⅱ型膠原和Sox-9表達水平要高于BMSCs成軟骨分化組（P＜0.05），二者Ⅹ型膠原的表達沒
6、有統(tǒng)計學(xué)差異。實驗結(jié)論：1.SMSCs自我更新能力強，具有成骨、成脂、成軟骨分化的能力，表現(xiàn)出了干細胞典型的生物學(xué)特性。2.SMSCs的成軟骨分化能力強于BMSCs，相反，BMSCs成骨分化能力要強于SMSCs，因此在組織工程中，軟骨組織缺損修復(fù)可首選SMSCs作為種子細胞，骨組織缺損修復(fù)可首選BMSCs。3.本文系統(tǒng)地比較了BMSCs和SMSCs在組織工程應(yīng)用中最常見的成骨和成軟骨分化能力，為今后組織工程中定向分化的種子細胞的選擇提供了一定的理論依據(jù)。關(guān)鍵詞：滑膜間充質(zhì)干細胞，骨髓間充質(zhì)干細胞，成骨，
7、成軟骨，組織工程，種子細胞IIAbstractMesenchymalstemcellsareappliedintissueengineeringasseedcellsduetotheself-renewalcapacityandtheabilitytodifferentiateintomesenchymallineagesincludingbone，cartilage，fat，muscleandnerve.Bonemarrowmesenchymalstemcellshavebeenconsideredt
8、obetheprogenitorcellsforbonetissueengineering,andsynovium-derivedmesenchymalstemcells,asanewmemberofthefamilyofstemcells,havebeendescribedaspromisingseedcellsowingtothegreaterchondrogenicpotential.Hence,itisofimportantclin
