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《鐵過載對骨髓造血微環(huán)境的影響及作用機制》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、分類號：R551.3學(xué)校代碼：10062密級：學(xué)號：2012602410碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目：鐵過載對骨髓造血微環(huán)境的影響及作用機制TITLEEffectandmechanismonbonemarrowmicroenvironmentaffectedbyironoverload一級學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科：內(nèi)科學(xué)血液病論文作者：張宇辰指導(dǎo)教師：趙明峰天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二〇一五年四月分類號：R551.3學(xué)校代碼：10062密級：學(xué)號：2012602410學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位?專業(yè)學(xué)位?學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)碩士學(xué)位論文MASTE
2、R’SDISSERTATION論文題目：鐵過載對骨髓造血微環(huán)境的影響及作用機制TITLEEffectandmechanismonbonemarrowmicroenvironmentaffectedbyironoverload一級學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科：內(nèi)科學(xué)血液病論文作者：張宇辰指導(dǎo)教師：趙明峰導(dǎo)師組成員：李玉明鄧琦天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二〇一五年四月學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨立進行研究工作取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容和致謝的地方外，論文中不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，與我一同工
3、作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解天津醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，并采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編以供查閱和借閱。同意學(xué)校向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文，并編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫。保密，在年解密后適用本授權(quán)書。本論文屬于不保密√。(請在相對應(yīng)的方框內(nèi)打“√”)學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日導(dǎo)師簽名：日期：年月日天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要目的：探討小鼠鐵過載對骨髓造血微環(huán)境
4、的影響及去鐵、抗氧化治療對其損傷的保護作用。內(nèi)容：通過建立小鼠鐵過載動物模型，研究鐵過載對骨髓造血微環(huán)境的影響及可能機制，并探討地拉羅司去鐵及NAC抗氧化治療后，對該損傷作用的逆轉(zhuǎn)情況，為臨床治療繼發(fā)性鐵過載提供實驗依據(jù)。方法：1.通過4Gyγ射線全身照射和(或)右旋糖酐鐵腹腔注射建立正常和骨髓損傷情況下的鐵過載小鼠模型，通過①病理組織切片蘇木精-伊紅染色與普魯士藍染色的方法分析鐵過載小鼠肝臟、脾臟、骨髓的形態(tài)及鐵沉積情況；②流式細胞儀檢測骨髓間充質(zhì)干細胞(BM-MSCs)內(nèi)可變鐵池(LIP)水平驗證鐵過載模型的成功建立。2.利用倍增時間及CCK8試劑盒檢
5、測BM-MSCs的增殖能力；利用成骨及成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)BM-MSCs向成骨及成脂細胞分化；采用油紅-o、堿性磷酸酶（ALP）、茜素紅染色檢測BM-MSCs成骨及成脂定向分化能力；利用共培養(yǎng)的方法檢測BM-MSCs的造血支持能力；利用骨髓病理免疫組化檢測骨髓微環(huán)境造血因子的表達。3.采用2’,7’-二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)探針法檢測鐵過載前后小鼠BM-MSCs活性氧(ROS)水平；利用Real-timeRT-PCR方法檢測ROS相關(guān)基因FOXO3、PI3K水平的表達；成骨相關(guān)基因RUNX2、ALP、OCN，成脂相關(guān)基因PPARg、Adipsin
6、、aP2的表達；檢測骨髓造血微環(huán)境造血因子VEGF、CXCL12、SCF的表達。4.經(jīng)地拉羅司(DFX)去鐵或經(jīng)N-乙酰半胱氨酸（NAC）抗氧化治療后，檢測上述指標(biāo)的變化。結(jié)果：1.小鼠肝臟、脾臟、骨髓內(nèi)可見大量鐵沉積，BM-MSCs內(nèi)LIP水平明顯升高，I天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文提示鐵過載模型成功建立；2.鐵過載抑制BM-MSCs的增殖能力，鐵劑組倍增時間（1.74±0.36天）長于對照組(1.03±0.17天)（p<0.05）。鐵過載影響B(tài)M-MSCs的成骨及成脂分化的平衡，鐵過載組成骨細胞ALP表達及茜素紅染色減弱，成脂細胞油紅-O染色增強。3.鐵過
7、載抑制BM-MSCs的造血支持能力，在與骨髓單個核細胞（BMMNCs）共培養(yǎng)1周后，其支持BMMNCs形成的造血細胞集落形成單位數(shù)(CFU-E,BFU-E,CFU-GM和CFU-mix)均明顯低于對照組(P<0.05)。4.鐵過載抑制骨髓造血微環(huán)境造血因子VEGF、CXCL12、SCF的表達，免疫組化及RT-PCR結(jié)果顯示與對照組比較，鐵劑組造血因子VEGF、CXCL12、SCF表達明顯減弱，經(jīng)去鐵或抗氧化處理后，上述改變部分恢復(fù)(P<0.05)。5.加鐵組BM-MSCs內(nèi)ROS水平明顯高于對照組；且通過檢測ROS相關(guān)的信號通路發(fā)現(xiàn)，加鐵組BM-MSCs的
8、FOXO3表達減少、PI3K表達明顯升高(P<0.05)，當(dāng)給予D
