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《針對toxr基因建立的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(lamp)法檢測副溶血》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、-8-/91.針對toxR基因建立的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）法檢測副溶血性弧菌=DevelopmentofatoxR-basedloop-mediatedisothermalamplificationassayfordetectingVibrioparahaemolyticus[關(guān)鍵詞]toxR基因；等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）技術(shù)檢測；副溶血性弧菌本研究通過toxR建立了高特異、敏感的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）技術(shù)檢測牡蠣中的副溶血性弧菌。根據(jù)已有的toxR序列設(shè)計(jì)了5對引物，使用36株副溶血性弧菌和其他39株菌株進(jìn)行了特異性檢測；使用ATCC27969菌株，進(jìn)行了靈敏度實(shí)驗(yàn)，梯度稀
2、釋從108CFU/ml到0。該方法具有很好的特異性，純培養(yǎng)中的檢出限為47-470個(gè)細(xì)胞，是普通PCR的100倍；不用富集可以檢測到每克牡蠣樣品中的1.1×105個(gè)副溶血性弧菌細(xì)胞，達(dá)到普通PCR100倍以上的靈敏度。純培養(yǎng)和牡蠣樣品中檢測時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)曲線表明細(xì)胞數(shù)量與熒光或渾濁度信號間有很好的線性關(guān)系。以后可以應(yīng)用到生蠔中副溶血性弧菌的檢測。（http://www.biomedcentral.com/1471-2180/10/41，2010）2.基于16S-23SrRNA基因間隔區(qū)的PCR方法區(qū)分弧菌種=PCR-basedmethodfortargeting16S-23SrRNAi
3、ntergenicspacerregionsamongVibriospecies[關(guān)鍵詞]基因；PCR；弧菌本研究開發(fā)了一種基于基因間隔區(qū)（IGS）可以對弧菌分型的新穎、快速的聚合酶鏈反應(yīng)（PCR），該方法針對細(xì)菌染色體上的16S和23SrRNA基因間的間隔序列。利用毛細(xì)管電泳技術(shù)的優(yōu)勢進(jìn)行了系統(tǒng)優(yōu)化，解決了異源雙鏈形成并實(shí)現(xiàn)了快速的重現(xiàn)分析。通過對69株典型的弧菌進(jìn)行了系統(tǒng)驗(yàn)證，建立了48種弧菌基因間隔區(qū)分型數(shù)據(jù)庫。通過幾種聚類方法分析這些數(shù)據(jù)，都能夠很好區(qū)分這69種類型的菌株，表明該P(yáng)CR指紋方法能夠在種的水平上很好區(qū)分弧菌。這種快速、可靠、高效的基因間隔區(qū)分型方法體系，特別
4、是結(jié)合16SrRNA基因測序，不但能夠在種的水平上區(qū)分、鑒定，而且在某些情況下，可以達(dá)到亞種的水平。（http://www.biomedcentral.com/1471-2180/10/90，2010)3.比較基因組分析表明弧菌的兩個(gè)新種與霍亂弧菌密切相關(guān)=ComparativegenomicanalysisrevealsevidenceoftwonovelVibriospeciescloselyrelatedtoV.cholerae[關(guān)鍵詞]基因組測序；PCR；霍亂弧菌研究利用基因組測序鑒定-8-/9兩個(gè)弧菌新種：RC341和RC586。根據(jù)整個(gè)基因組的平均核苷酸值（ANI）、
5、平均氨基酸值（AAI）、rpoB基因相似性，多基因序列分析（MLSA）和系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果，新種與霍亂弧菌和擬態(tài)弧菌相似。在鑒別和選擇性培養(yǎng)基上RC341和RC586分別表現(xiàn)出與霍亂弧菌和擬態(tài)弧菌相似，但它們的基因組存在12至15％的差別。RC341和RC586分別有2104（59％）和2058（56％）個(gè)開放閱讀框與已研究的霍亂弧菌和擬態(tài)弧菌的主要基因組相似；兩新種間有2926個(gè)相似；并發(fā)現(xiàn)了霍亂弧菌和擬態(tài)弧菌的毒力相關(guān)因子和毒力島其中包括VSP-I和II。分析結(jié)果表明以前稱為霍亂弧菌變種的這兩種環(huán)境弧菌，是從霍亂弧菌和擬態(tài)弧菌進(jìn)化分支上進(jìn)化的新物種。(http://ukpmc.
6、ac.uk/abstract/MED/20507608，2010)1.為什么細(xì)菌的次要染色體上的基因進(jìn)化更快=WhyGenesEvolveFasteronSecondaryChromosomesinBacteria[關(guān)鍵詞]基因；染色體；進(jìn)化從伯克氏菌和弧菌兩個(gè)屬中選擇由復(fù)染色體組成的細(xì)菌基因組，并量化了各屬內(nèi)同源基因的進(jìn)化速率（dN和dS）。次要染色體上同源基因的兩個(gè)進(jìn)化速率參數(shù)比在主要染色體上的要大。此外，發(fā)現(xiàn)在次要染色體上存在較弱的密碼子使用偏好。更快的變異和通用密碼子影響染色體定位，使得次要染色體上的基因在較少的復(fù)制下或特異基因的選擇下，能夠較快適應(yīng)選擇。使用復(fù)染色體和單
7、染色體上共有的同源基因評價(jià)了這些選擇。這些同源基因的調(diào)整分析表明本質(zhì)上快速進(jìn)化的基因存在于次要染色體上；但是，次要染色體的長期進(jìn)化促進(jìn)了置換速率。總之，細(xì)菌的次要染色體是進(jìn)化區(qū)，在這里基因可能因?yàn)檩^少的使用，而保護(hù)較弱，從而進(jìn)化更快。（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20369015，2010）2.DNA腺嘌呤甲基化保證了霍亂弧菌的兩個(gè)染色體在每一細(xì)胞周期只復(fù)制一次=DNAAdenineMethylationIsRequiredtoRepli
