雙基因ngf-ires-bmp2真核質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠bmscs誘導(dǎo)成骨的實(shí)驗(yàn)研究

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1、分類號Ｒ６８３．４學(xué)校代碼１０６０１密級公開編號Ｙ１２００２１１３接各屋如戀碩±學(xué)位論文ＮＧＦ－－雙基因ＩＲＥＳＢＭＰ２真核質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠ＢＭＳＣｓ誘導(dǎo)成骨的實(shí)驗(yàn)研究學(xué)科專業(yè)：骨外科￣￣研究方向：四肢創(chuàng)傷與骨組織工程研究生姓名：宇學(xué)號：Ｙ１２００２１１３學(xué)位類型科學(xué)學(xué)位￣￣導(dǎo)師姓名：＾ｍ涌教授二〇—五年五月獨(dú)創(chuàng)聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及?。崳姷玫难芯砍晒?jù)我所知，除了文中特別加ｙ標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含未獲得（注；如沒有

2、其他需要特別聲明的，本欄可空）或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書使用過的材料一。與我同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。％學(xué)位論文作者簽名簽字日期；年《月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全ｙ解桂林醫(yī)學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)桂林醫(yī)學(xué)院可將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可１＾采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同時授權(quán)中國學(xué)術(shù)期刊（光盤版）電子雜志社、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位

3、論文收錄到《中國優(yōu)秀博碩±學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》、《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。（保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書）學(xué)位論文作者簽名ｒ進(jìn)導(dǎo)師簽字；０確ｆ鄭簽字曰期：年／月〇曰簽字曰期；７／又斗／月／目錄雙基因NGF-IRES-BMP2真核質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs誘導(dǎo)成骨的實(shí)驗(yàn)研究…………………………………………………………………………………………………………...1中文摘要……………………………………………………...............................1ABSTRACT………………………………………………

4、……………………..2英漢縮略詞對照表……………………………………………………………...5前言……………………………………………………………………………...61材料與方法…………………………………………………………………...71.1實(shí)驗(yàn)試劑與儀器……………………………………………………………71.2主要實(shí)驗(yàn)試劑………………………………………………………………81.3實(shí)驗(yàn)方法…………………………………………………………………..102結(jié)果………………………………………………………………………….182.1大鼠BMSCs形態(tài)學(xué)觀察........................

5、.......................................................182.2大鼠BMSCs流式細(xì)胞鑒定………………………………………………………………………182.3western‐blot檢測NGF與BMP2目的蛋白的表達(dá)………………………………….192.4免疫組織化學(xué)染色檢測I型膠原蛋白的表達(dá)………………………………………….202.5轉(zhuǎn)染后各組大鼠BMSCs培養(yǎng)14天后進(jìn)行茜蘇紅染色并鈣結(jié)節(jié)計(jì)數(shù)…213討論……………………………………………………………………………………………………………234結(jié)論…………………………………………

6、………………………………………………………………….285參考文獻(xiàn)……………………………………………………………………………………………………29綜述……………………………………………………………………………………………………………….33攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄…………………………………………………………….49致謝……………………………………………………………………………………………………………….50III雙基因NGF-IRES-BMP2真核質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs誘導(dǎo)成骨的實(shí)驗(yàn)研究中文摘要目的運(yùn)用基因工程的手段將雙基因真核質(zhì)粒載體pCDNA3.1-NGF-IRES-B

7、MP2轉(zhuǎn)染入大鼠BMSCs中，研究其誘導(dǎo)成骨后目的蛋白的表達(dá)情況方法取三月齡SD大鼠，頸椎脫臼處死后，通過全骨髓培養(yǎng)法分離培養(yǎng)大鼠BMSCs并穩(wěn)定傳代。倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長形態(tài)，運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測大鼠BMSCs表面標(biāo)志物CD31、CD90。取第三代大鼠BMSCs，分為五組，單基因pCDNA3.1-NGF轉(zhuǎn)染組（A組），單基因pCDNA3.1-BMP2轉(zhuǎn)染組（B組），雙基因pCDNA3.1-NGF-IRES-BMP2轉(zhuǎn)染組（C組），空質(zhì)粒組（D組），陰性對照組（E組）。運(yùn)用