豬瘟活疫苗佐劑的制備及其增強(qiáng)疫苗免疫效果評價(jià)

豬瘟活疫苗佐劑的制備及其增強(qiáng)疫苗免疫效果評價(jià)

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1、分類號學(xué)號M201271581學(xué)校代碼10487密級碩士學(xué)位論文豬瘟活疫苗佐劑的制備及其增強(qiáng)疫苗免疫效果評價(jià)學(xué)位申請人:梁孔賢學(xué)科專業(yè):生化與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師:劉衛(wèi)教授答辯日期:2015年5月20日AThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceStudyonPreparationandEvaluationImmunityEffectofAdjuvantforLiveVaccineAgainstClassicalSwineFeverCandidate:LiangKongxia

2、nMajor:BiochemistryandMolecularBiologySupervisor:Prof.LiuWeiHuazhongUniversityofScience&TechnologyWuhan430074,P.R.ChinaMay,2015獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知,除文中已經(jīng)標(biāo)明引用的內(nèi)容外,本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體,均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名:日期:年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論

3、文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即:學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版,允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)華中科技大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索,可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□,在年解密后適用本授權(quán)書。本論文屬于不保密□。(請?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“√”)學(xué)位論文作者簽名:指導(dǎo)教師簽名:日期:年月日日期:年月日華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要豬瘟是嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的一種病毒性傳染病,注射豬瘟疫苗是預(yù)防豬瘟的重要方法。目前常用的豬瘟疫苗佐劑副作用較強(qiáng),安全性和增強(qiáng)免疫效果有待提高,同時(shí),還存在黏度高,注射使用不方

4、便等問題。本文針對新發(fā)展的豬瘟活疫苗,研制安全性好、能夠有效增強(qiáng)免疫效果、使用方便的豬瘟活疫苗新型佐劑,并對O/W乳劑型豬瘟活疫苗佐劑的安全性和增強(qiáng)免疫效果進(jìn)行評價(jià)。對W/O/W乳劑型疫苗佐劑和聚合物凝膠佐劑的處方和制備工藝進(jìn)行了初步研究。開展的主要研究工作如下:(1)采用高壓均質(zhì)技術(shù)制備了O/W乳劑型豬瘟活疫苗佐劑,采用響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化了豬瘟活疫苗佐劑的處方和制備工藝,并對其穩(wěn)定性、粒徑、多分散指數(shù)(PDI)及Zeta電位進(jìn)行表征。優(yōu)化處方和工藝制備的O/W型疫苗佐劑平均粒徑為100.4nm,PDI為0.147,Zeta電位為-28.7mV,離心穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明其穩(wěn)定性良好。(2)進(jìn)行了O

5、/W乳劑型豬瘟活疫苗佐劑小鼠安全性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明,注射佐劑組小鼠體重和生存狀態(tài)與空白對照組相比較沒有差異,沒有出現(xiàn)由佐劑引起的死亡或者明顯的局部和全身不良反應(yīng)。兩周后解剖小鼠,檢查發(fā)現(xiàn)其注射部位及心、肝、脾、肺、腎均正常,沒有中毒癥狀。表明研制的O/W型豬瘟活疫苗佐劑安全性良好。(3)將O/W乳劑型疫苗佐劑與豬瘟疫苗混合后,肌肉注射免疫小鼠,進(jìn)行佐劑增強(qiáng)免疫效果評價(jià)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,佐劑組小鼠血清中抗豬瘟(CSFV)抗體水平與對照組有顯著差異,抗體水平能夠持續(xù)較長的時(shí)間,表明O/W乳劑型豬瘟活疫苗佐劑能夠有效誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答;佐劑組小鼠血清中IL-4、IL-6和IFN-γ的水平均有明顯

6、提高,表明該疫苗佐劑能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答。(4)采用高速分散結(jié)合高壓勻質(zhì)技術(shù)制備W/O/W乳劑型疫苗佐劑,對其處方和制備工藝進(jìn)行了研究,通過篩選確定了乳化性能好的復(fù)合乳化劑和高壓勻質(zhì)制備工藝條件,優(yōu)化制備的W/O/W乳劑型疫苗佐劑穩(wěn)定性好,黏度適中。(5)開展了聚合物凝膠佐劑的處方和制備工藝研究,對聚合物凝膠基質(zhì)、乳化劑、油相以及高壓勻質(zhì)工藝進(jìn)行了篩選和優(yōu)化,優(yōu)化處方和工藝制備的聚合物凝膠佐劑平均粒徑為221.6nm,PDI為0.114,Zeta電位為-29.7mV,穩(wěn)定性良好。I華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文關(guān)鍵詞:豬瘟活疫苗;O/W乳劑型佐劑;W/O/W乳劑型佐劑;聚合物凝膠佐劑;安全

7、性;增強(qiáng)免疫效果II華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractClassicalswinefever(CSF)isanoftenfatalandhighlycontagiousviraldiseaseofdomesticpigs,whichmayresultindevastatingfinanciallosses.VaccineinjectionisanimportantmethodtopreventCSF.T

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