染色體分帶技術(shù)

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1、染色體分帶技術(shù)（牛?命科學(xué)學(xué)院05級應(yīng)生楊紹友054120211）摘要：染色體是細(xì)胞遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)，它對生物的發(fā)育、遺傳、變異、進(jìn)化和增殖等過程的調(diào)節(jié)和控制都具有極大的意義。關(guān)鍵詞：染色體；技術(shù)；分帶；應(yīng)用染色體顯帶（chrorm）mebanding）是-?項(xiàng)借助某些特殊的染色稈序使染色體在?定部位內(nèi)顯現(xiàn)出深淺不一的帶紋的細(xì)胞學(xué)技術(shù).由十特定染色體有其特定的帶紋，因此顯帶可作為鑒別單-個染色體和染色體組的手段，從而可以深入地認(rèn)識個別染色體做岀染色體組的帶型。研究、記載染色體核型已有100多年歷史，但對染色體木身進(jìn)行深入細(xì)致灼分析，是近50年才發(fā)展起

2、來。低滲處理和空氣干燥制片法的發(fā)明.組織培養(yǎng)和秋水仙素的仗用.帶來了60年代動物和人類細(xì)胞遺傳學(xué)的繁榮時期。這個時期染色體血臨的4：.}a贏是:許多動物核型中染色體的人小，形態(tài)很相似，難于精確區(qū)分，而于?頭可用的鑒別標(biāo)準(zhǔn)乂屈指可數(shù)，不外是染色體長度、著絲.載位毅、次級痕的多少和分布等等。即使采用放射白顯影或借助電子汁其機(jī)牢染色體舊像分析，幫助也不大。染色體分帶研究白然地成了主攻方向。此時，瑞典灼Jasperssoo采用特殊的熒光染料，使染色體分化染色，在熒光顯微鏡下顯示出清晰的帶紋。嗣后紛至踏來的各種分帶技術(shù)相繼出現(xiàn)，為染色體的精確鑒別提供了一條嶄

3、新的途徑。在此將叢以下幾種帶型的進(jìn)行講述：1染色體帶型1.1Q帶早就知道，許多熒光染料都能使染色體染上色。6D年代末期，瑞典著名的細(xì)胞光度計(jì)專家TQaspersson,在化學(xué)家Ed-Modest的幫助下成功地合成了芥了哇叮因（明）。并用它在植物和中國倉鼠染色體上進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)中期染色體經(jīng)QM染色后在熒光顯微鏡下顯示了亮度不同的特征性熒光帶。以后他們乂把這種技術(shù)用于人類染色體，結(jié)果是同樣地令人滿意。根據(jù)Q帶的位置、闊度、亮度，兒乎可以精確無誤地一一區(qū)別每對染色體。在染色體命名國際標(biāo)準(zhǔn)化巴黎會議上（1971）,稱這種帶為Q帶。1.2C帶?197。年初A

4、rrighi和Hs。在硏究人炎染色體的高度重復(fù)DNA分布時，偶然觀察到著絲點(diǎn)區(qū)的以emsa染色較深，其他區(qū)域淡染。深染區(qū)的人小對于每一條染色體染色體是值定的，特征性的。也就在同一吋候，MaryLouFardue著名的分子細(xì)胞學(xué)家在以原位分子雜交方法研究小鼠衛(wèi)星DNA分布時，發(fā)現(xiàn)經(jīng)變性和復(fù)性處理的小亂染色體，其若絲點(diǎn)區(qū)利骨的英它部分染色不同。這種對結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)特征性染色所顯示的帶紋被稱為C帶。屮期相染色體經(jīng)適當(dāng)?shù)乃釅A處理后用吉姆廬染色可顯示G帶。此外，老化幾年以上的染色體宜接用吉姆薩染色也能顯示出C帶。1.3G帶及高分拼率G帶在C帶染色過程中，許多實(shí)

5、狡室都觀察到，有時染色體的常染色質(zhì)區(qū)會顯示.＞丫淺不同的帶紋。經(jīng)過各種修改后，形成今夭我們稱謂ASG染色叩減性處理，鹽溶液孵育，Giemsa染色的分帶方法，這種帶紋稱為G帶。除了Q帶外，這是首次可以顯示染色體分化的G帶方法。用各種各樣的化學(xué)試劑如膠酶、蛋白酶、洗滌劑、尿素、高鐳酸鉀等等作預(yù)處理，然后Gie,sa染色,都可得到十分消晰的染色體帶紋。其中尤以膠酶消化法重復(fù)性好，帶紋消晰，反差強(qiáng)，為各室狡室所采用。膠終處理法主要是將染色體制片置37'C0.25萬膠醉液小進(jìn)行消化處理，處理時間隨片齡(染色體制片保存的日數(shù))和處理前烤片時間的長短而定。一般片

6、齡長或老化程度高，處理吋間就有所增加?；虿捎脤⑷旧w制片經(jīng)0.02F阿膠醉室沮處理兒秒鐘后，再入2xssc溶液屮，在60*C沮育i小時，結(jié)合吉姆薩染色亦能獲得清晰的G帶。1.4R帶在G帶出現(xiàn)的差不多時間，法國Dutrliaux(I,71)以85"C的磷酸鹽溶液處理染色體片子，然后以Giemsa染色，得到和ASG法正好相反的帶紋，稱之謂R帶。Prantara等人采用5微克/毫升的色霉素A2或橄欖霉索配置在含2.5M抓化鎂的研酸級沖液(D.I5M敘化鈉，0.03M抓化鉀和0.01M破酸級鈉，調(diào)節(jié)PH二0)屮處理20分鐘后，在上述緩沖液屮封片。在不同的激

7、光健光鏡下產(chǎn)生不同的激發(fā)光波而使同一染色體上同時顯現(xiàn)出Q兩Tr1.5N帶N一?帶是顯示染色體上核仁組織區(qū)(nucleolarorganizingregions,NORS)的分帶方法。Matsui(1974)首先使用該法在蠶豆染色體上顯示｝N—帶，F(xiàn)unaki等人(1975)改良)N—帶流程，并在27種動、植物染色體上均成功地顯示出了N—帶，此即至今國內(nèi)外廣泛應(yīng)用的N—帶技術(shù)，共操作流程為:干燥制片在％%左右的1mol/miNazPoy水溶掖中處理10多分鐘(處理時間因種而異)，水洗0.5小時后,用4%Giemsa液(pH7.0)染色。-?系列的研究

8、結(jié)果表明，在許多雙子葉和部分單子葉植物中，該技術(shù)對于顯示NORS具有比較穩(wěn)定的專一性，但在小麥、大麥、山羊草等禾本科植物中