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1、細菌感染的病原學診斷（一）標本的采集要求：1.早期采集：盡量在發(fā)病早期、應用抗生素之前采集2.根據(jù)標本的種類及可能的目的菌的特性選擇不同的標本采集方法3.無菌采集：嚴格無菌操作，采集后標本置于無菌容器，且不得接觸任何抗菌物質(zhì)和消毒劑4.標本采集要足量5.安全采集一、臨床標本的采集與處理原則（二）標本的運送、保存與處理標本采集后應盡快送檢，厭氧菌必須在2h內(nèi)送檢。1.床邊接種2.置于保存液或轉(zhuǎn)運培養(yǎng)基中送檢3.針對可能存在的病原體的特點對標本進行冷藏、保溫或保持厭氧狀態(tài)進行送檢4.標本送檢過程中應注意安全不染色標本檢查法染色標本檢查法二、細菌
2、的形態(tài)學檢查主要用于觀察細菌的動力及其運動狀態(tài)1.懸滴法2.壓滴法3.毛細管法4.暗視野顯微鏡檢查法5.相差顯微鏡檢查法（一）不染色細菌標本的檢查細菌染色標本的制作程序涂片→干燥→固定→染色（二）細菌染色標本的檢查（1）單染色法只用一種染料色的方法制片→結(jié)晶紫1min→水洗→晾干、油鏡檢（2）復染色法革蘭染色法（Gramstain）抗酸染色法（acid-faststain）（3）特殊結(jié)構(gòu)染色法3.細菌常用的染色方法革蘭染色法（Gramstain）方法（改良快速法）初染：結(jié)晶紫＋等量NaHCO33～5s，水洗媒染：堿性碘液3～5s，水洗脫色：
3、丙酮酒精3～5s，水洗復染：堿性稀釋復紅3～5s，水洗結(jié)果紫色：革蘭陽性菌紅色：革蘭陰性菌原理方法（Ziehl－Neelsen染色法）初染：5％石碳酸復紅加溫染3～5min，水洗脫色：3%鹽酸酒精1min，水洗復染：堿性美蘭1min，水洗抗酸染色法（acid-faststain）結(jié)果紅色：抗酸性細菌藍色：非抗酸性細菌注意事項一張玻片只能涂染一份標本不能使用染色缸染色關(guān)鍵：脫色時間的長短特殊結(jié)構(gòu)染色法莢膜染色（capsulestain）芽胞染色（sporestain）鞭毛染色（flagellumstain）細菌的接種與分離培養(yǎng)技術(shù)一、培養(yǎng)基（
4、culturemedium）（一）定義用人工方法將適合細菌生長需要的各種營養(yǎng)物質(zhì)配制成的混合營養(yǎng)制品。營養(yǎng)物質(zhì)氮源、碳源、無機鹽類、生長因子等凝固物質(zhì)瓊脂、明膠、卵白蛋白等抑制劑抗生素、化學物質(zhì)、染料等指示劑酚紅、溴甲酚紫、中性紅等（二）培養(yǎng)基的組成成分按用途分類基礎(chǔ)培養(yǎng)基（basicmedium）牛肉湯、普通瓊脂平板營養(yǎng)培養(yǎng)基（nutrientmedium）血瓊脂平板、巧克力血平板鑒別培養(yǎng)基(differentialmedium)糖發(fā)酵管、KIA、MIU選擇培養(yǎng)基（selectivemedium）SS瓊脂、麥康凱瓊脂特殊培養(yǎng)基（speci
5、almedium）厭氧菌培養(yǎng)基、細菌L型培養(yǎng)基（三）培養(yǎng)基的種類按物理性狀分類固體（平板、斜面、高層）半固體液體（一）接種工具接種環(huán)與接種針二、細菌的接種與分離技術(shù)（二）細菌的接種方法1.平板劃線分離法用于細菌標本的分離純化。2.瓊脂斜面接種法主要用于單個菌落的純培養(yǎng)及保存菌種，也可用于某些生化鑒定試驗的接種。3.穿刺接種法用于半固體培養(yǎng)基或KIA、明膠等具有高層的培養(yǎng)基接種。半固體培養(yǎng)基的穿刺接種可用于觀察細菌的動力。用于各種液體培養(yǎng)基如肉湯、蛋白胨水、糖發(fā)酵管等的接種。4.液體接種法5.傾注平板法細菌定量培養(yǎng)6.涂布法L棒涂布。增菌培養(yǎng)
6、、活菌計數(shù)、藥敏試驗等。四、細菌的培養(yǎng)方法1.需氧培養(yǎng)（普通培養(yǎng)）需氧菌或兼性厭氧菌在有氧條件下進行的培養(yǎng)普通孵育箱37?C18~24h觀察培養(yǎng)結(jié)果平板已接種好的斜面試管少數(shù)生長緩慢的細菌需要培養(yǎng)3~7d直至1個月才能生長。2.二氧化碳培養(yǎng)將已接種培養(yǎng)基置于5%~10%CO2環(huán)境中進行培養(yǎng)的方法。（2）燭缸培養(yǎng)：簡單易行，不需特殊設(shè)備，尤其適用于基層實驗室。（1）二氧化碳培養(yǎng)箱：能自動調(diào)節(jié)CO2的含量、溫度和濕度。3.厭氧培養(yǎng)厭氧菌對O2敏感，培養(yǎng)過程中需造成低氧化還原電勢的厭氧環(huán)境。物理法、化學法、生物法。厭氧罐培養(yǎng)法、氣袋法、厭氧手套箱
7、法、需氧菌共生厭氧法等。五、細菌的生長現(xiàn)象細菌的菌落特征:菌落大小形狀（露滴狀、圓形、菜花樣、不規(guī)則等）高度（突起、扁平或凹陷）邊緣（整齊、波形、鋸齒狀、卷發(fā)狀等）表面（光滑、粗糙等）濕潤度（干燥、濕潤等）透明度（不透明、半透明、透明等）顏色（紅色、灰白色、黑色、綠色、黃色或無色等）溶血性（α溶血、β溶血或γ溶血）特殊氣味半固體觀察動力陰性動力陽性表面菌膜生長均勻混濁生長沉淀生長細菌在液體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象細菌的生化反應不同細菌具有不同的酶系統(tǒng)，對糖和蛋白質(zhì)的分解能力不同，因而其代謝產(chǎn)物也各異。據(jù)此可利用生物化學方法檢測這些代謝產(chǎn)物以區(qū)別和
8、鑒定不同細菌。原理1.糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗一、碳水化合物代謝試驗用途糖發(fā)酵試驗是鑒定細菌最常用的生化反應，特別用于腸桿菌科細菌的鑒定。2.氧化/發(fā)酵試驗（O／F試驗）又稱葡萄糖
