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1、第十四章RNA的生物合成Transcription學(xué)習(xí)目的及基本要求（1）掌握轉(zhuǎn)錄的概念及轉(zhuǎn)錄的基本過(guò)程。（2）熟悉RNA轉(zhuǎn)錄后的加工修飾過(guò)程。2教學(xué)內(nèi)容（1）轉(zhuǎn)錄的概念、不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄的含義；編碼鏈和非編碼鏈的意義；原核生物RNA聚合酶的組成及作用；真核生物RNA聚合酶的分類及作用。（2）啟動(dòng)子的定義及-35區(qū)與-10區(qū)的堿基組成特點(diǎn)，轉(zhuǎn)錄泡結(jié)構(gòu)特征。（3）轉(zhuǎn)錄的基本過(guò)程；原核生物轉(zhuǎn)錄終止的方式及ρ因子的作用。（4）三種RNA轉(zhuǎn)錄后的加工修飾；核酶的概念及結(jié)構(gòu)特征。3考核知識(shí)和考核要求（1）識(shí)記：轉(zhuǎn)錄、啟動(dòng)子、核
2、酶的定義；原核生物RNA聚合酶的組成成分和各亞基的功能；真核生物RNA聚合酶的分類及作用；ρ因子在轉(zhuǎn)錄終止過(guò)程中的作用。（2）領(lǐng)會(huì):mRNA的轉(zhuǎn)錄后加工修飾（編輯）在蛋白多樣性中的意義。（3）簡(jiǎn)單運(yùn)用：核酶的研究進(jìn)展及其在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用。4概述基因表達(dá)(geneexpression)轉(zhuǎn)錄(transcription)轉(zhuǎn)譯(translation)四類RNA：rRNA、mRNA、tRNA、smallRNA(snRNA、miRNA)及RNAworld5第一節(jié)DNA指導(dǎo)RNA的合成轉(zhuǎn)錄(transcription)：
3、以DNA為模板，四種三磷酸核苷為原料，按照堿基配對(duì)原則，在RNA聚合酶催化下合成RNA的過(guò)程。即把DNA的堿基序列轉(zhuǎn)抄為互補(bǔ)的RNA堿基排列順序。6轉(zhuǎn)錄的特點(diǎn)1、轉(zhuǎn)錄方式為不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄2、無(wú)需引物3、RNA聚合酶催化4、底物為NTP5、方向?yàn)?’→3’7轉(zhuǎn)錄的體系DNA模板RNA聚合酶底物NTPMg2+、Mn2+等無(wú)機(jī)離子8一、RNA聚合酶Weiss的鼠肝抽提物RNA聚合酶(DNAdependentRNApolymerase,DDRP,RNA-pol)原核一種、真核三種RNA聚合酶NTP+(NMP)n(NMP)n
4、+1+PPiRNA-pol,Mg2+9（一）原核生物的RNA聚合酶大腸桿菌(E.coli)RNA聚合酶：4種亞基?、?、?’、?組成的五聚體蛋白質(zhì)，分子量465kD。亞基分子量功能?36512決定哪些基因被轉(zhuǎn)錄?150618與轉(zhuǎn)錄全過(guò)程有關(guān)（催化）?’155613結(jié)合DNA模板（開鏈）?70263辨認(rèn)起始點(diǎn)?9000未知101）全酶(holoenzyme)：?2??’?，即?亞基+核心酶，?亞基的功能是辨認(rèn)轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)，轉(zhuǎn)錄起始階段需要全酶2）核心酶(coreenzyme)：?2??’能催化NTP按模板的指引合成
5、RNA，在轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)全過(guò)程中均起作用3）利福平(rifampicin)或利福霉素的作用4）合成速度和校正功能1112原核生物的RNA聚合酶全酶及其在轉(zhuǎn)錄起始區(qū)的結(jié)合，DNA雙鏈已打開，σ因子尚未脫落13（二）真核生物的RNA聚合酶真核生物的基因組遠(yuǎn)比原核生物龐大，其RNA聚合酶也更為復(fù)雜。真核生物的RNA聚合酶I、II、III都由多個(gè)亞基組成，可用電泳法將各亞基分離。真核生物RNA聚合酶中沒有細(xì)菌RNApol中s因子的對(duì)應(yīng)物，因此必須借助各種轉(zhuǎn)錄因子才能識(shí)別或選擇啟動(dòng)部位，并結(jié)合到啟動(dòng)子上。14酶的種類功能對(duì)a-
6、鵝膏蕈堿敏感性RNA聚合酶I合成45S-rRNA前體，經(jīng)加工產(chǎn)生5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA不敏感RNA聚合酶II合成所有mRNA前體(hnRNA)和大多數(shù)核內(nèi)小RNA(snRNA)敏感RNA聚合酶III合成小RNA，包括tRNA、5SrRNA、U6snRNA和scRNA中等敏感RNA聚合酶Mt合成線粒體內(nèi)的RNAs不敏感，但對(duì)利福平敏感15真核生物RNA聚合酶都是多亞基組成，并具有核心亞基。真核生物RNA聚合酶II都具有羧基末端結(jié)構(gòu)域(CTD)線粒體和葉綠體的RNA聚合酶RNA聚合酶的錯(cuò)誤
7、率高于DNA聚合酶16二、轉(zhuǎn)錄的模板不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄定義：就某一確定活化基因的轉(zhuǎn)錄，只能以DNA雙鏈的一條鏈作為模板，這種現(xiàn)象稱為不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄(asymmetrictranscription)。兩重含義：(1)雙鏈DNA只有一股單鏈用作模板參與轉(zhuǎn)錄。(2)模板鏈并非永遠(yuǎn)在同一單鏈上。17DNA雙鏈在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中只有一條鏈中的其中某一活化基因片段起作用，該鏈稱模板鏈(templatestrand)，又稱負(fù)(-)鏈；與其互補(bǔ)的鏈稱為編碼鏈(codingstrand)，又稱正(+)鏈。一般書寫都為編碼鏈。轉(zhuǎn)錄生成的RNA鏈與編
8、碼鏈的堿基序列相似，以U取代T。體外轉(zhuǎn)錄時(shí)會(huì)失控。18不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄19（一）啟動(dòng)子(promoter)概念：轉(zhuǎn)錄開始時(shí)RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合和開始轉(zhuǎn)錄的一段DNA序列。1.原核生物的啟動(dòng)子：40~60bp、起始部位、結(jié)合部位-10bp(-TATAAT-,TATA盒)、?因子識(shí)別部位-35bp區(qū)(-TTGACA-)RNApol保護(hù)法，下游和上游20轉(zhuǎn)譯21222.真核生物的啟動(dòng)子由轉(zhuǎn)錄因子
