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1、蛇鱗草提取液體外抑菌作用研究作者：鐘希文，梅全喜，高玉橋，林慧，胡瑩【摘要】 目的對蛇鱗草提取液體外抑菌作用進(jìn)行初步研究。方法采用試管二倍稀釋法測定蛇鱗草的最低抑菌濃度（MIC）和最低殺菌濃度（MBC）。結(jié)果蛇鱗草水提液對金黃色葡萄球菌的MIC為63mg/ml，MBC為500mg/ml，對大腸桿菌的MIC為250mg/ml。蛇鱗草醇提液對金黃色葡萄球菌的MIC為125mg/ml，MBC為500mg/ml，對大腸桿菌的MIC為250mg/ml，MBC為500mg/ml。兩種提取液對綠膿桿菌均未呈現(xiàn)抑菌活性。結(jié)論蛇鱗草提取液具有一定的抑菌和殺菌活性?！娟P(guān)鍵詞】蛇鱗草；抑菌活性；最低抑菌濃度；最低
2、殺菌濃度 蛇鱗草Abacopteristriphylla(Sw.)Ching，又名蛇退步、三枝標(biāo)、三叉蕨、入地蜈蚣，為蕨類金星蕨科新月蕨屬三羽新月蕨的干燥全草［1］。主產(chǎn)于廣東，在福建、廣西、云南、臺灣等地也有出產(chǎn)。蛇鱗草味辛、苦，性平，具清熱解毒，散瘀消腫、化痰止咳的功效，主要用于癰瘡癤腫、毒蛇咬傷、跌打損傷、濕疹、皮膚瘙癢以及急、慢性支氣管炎的治療。但其僅作為一種民間中草藥在使用，國內(nèi)外對其研究甚少，曾有報道其化學(xué)成分主要為三羽新月蕨苷（Triphyllin）A、B、C［2］。20世紀(jì)70年代初期，廣東省中山市中醫(yī)醫(yī)院以蛇鱗草為主藥研制成“復(fù)方蛇鱗草散”及“復(fù)方蛇鱗草膏”8，臨床上用于治
3、療毒蛇咬傷、甲溝炎、皮炎、濕疹、癰瘡癤腫等病癥，應(yīng)用至今療效確切，為該院中醫(yī)皮膚科、外科特色專藥。蛇傷專科以蛇鱗草為主藥研制的“蛇黃散”，用于治療初期瘡瘍，蛇傷蟲咬腫痛等［3～5］，其療效顯著，為中醫(yī)院蛇傷?？频奶厣珜Ｋ?。梅全喜等［6］報道了“蛇黃散”具有抗炎、鎮(zhèn)痛的藥理作用，然而，目前尚未見相關(guān)蛇鱗草體外抑菌活性等方面的文獻(xiàn)報道。本實(shí)驗(yàn)觀察蛇鱗草的體外抑菌作用，為充分發(fā)掘其市場潛力，開發(fā)其可利用性提供實(shí)驗(yàn)參考?！ ?材料 1.1實(shí)驗(yàn)材料與試劑蛇鱗草原植物采集于廣東中山市五桂山，經(jīng)鑒定為蛇鱗草Abacopteristriphylla(Sw.)Ching。實(shí)驗(yàn)菌株：金黃色葡萄球菌（ATCC25
4、923）、大腸桿菌（ATCC25922）、綠膿桿菌（ATTC27853），均由中山市中醫(yī)院檢驗(yàn)科提供。培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，批號：200901071）、營養(yǎng)肉湯（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，批號：200810267）。其余試劑均為分析純。 1.2儀器UV-754型紫外分光光度計；BS224S型電子天平（北京賽多利儀器系統(tǒng)有限公司）；LMQR-4060型立式滅菌器（山東新華醫(yī)療器械股份有限公司）；PYX-DHS-35×40型隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）；XSW-CJ-2A標(biāo)準(zhǔn)型凈化工作臺（吳江市津化設(shè)備總廠）。8 2方法與結(jié)果 2.1培養(yǎng)基的制備 2
5、.1.1營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基準(zhǔn)確稱取3.3g營養(yǎng)瓊脂至250ml錐形瓶中，加入100ml蒸餾水，加熱至全溶，調(diào)整pH為7.4，封瓶口后滅菌備用?！ ?.1.2營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基準(zhǔn)確稱取9g營養(yǎng)肉湯至500ml錐形瓶中，加入500ml蒸餾水，加熱至全溶，調(diào)整pH為7.4，封瓶口后滅菌備用。 2.2溶液制備 2.2.1蛇鱗草水提液的制備稱取50g蛇鱗草干品，剪碎放入燒杯中，加適量蒸餾水浸泡30min后加熱煎煮1h，經(jīng)過濾得第一次煎液；藥渣再加入適量蒸餾水加熱煎煮1h。合并兩次水煎液，濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于含生藥1g?！ ?.2.2蛇鱗草醇提液的制備稱取50g蛇鱗草干品，剪碎放入圓底燒瓶，加入適量稀釋
6、至60%的乙醇液，安裝回流裝置，加熱回流18h，過濾得第1次醇提液；藥渣再加入適量乙醇液加熱回流1h，過濾。合并兩次濾液，濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于含生藥1g?！ ?.2.3麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)液［7］的配制用電子天平稱取1.1756g氯化鋇，蒸餾水定容至100ml，配成0.048mol/L氯化鋇溶液；再量取1ml95%濃硫酸，加入94ml蒸餾水，配成0.18mol/L硫酸溶液。0.048mol/L氯化鋇0.5ml加0.18mol/L硫酸溶液99.5ml，混勻后用530nm波長比色調(diào)整其濁度，使吸光度為0.1該濁度為0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)，相當(dāng)于5×（107～108）CFU/ml。 2.2.4菌液［8］的配
7、制實(shí)驗(yàn)菌種經(jīng)平板分離培養(yǎng)24h后，挑取數(shù)個菌落置于生理鹽水試管中，校正濃度至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)，再用營養(yǎng)肉湯1∶100稀釋，使含菌量達(dá)到106CFU/ml為工作濃度。 2.3最低抑菌濃度（MIC）判定標(biāo)準(zhǔn)首先在觀察細(xì)菌對照組長菌呈渾濁狀，而藥物對照組不長菌，呈透明清亮狀的前提下，再觀察實(shí)驗(yàn)組試管的渾濁情況，以判斷不同濃度藥液的抑菌作用，如試管內(nèi)呈渾濁，表明有細(xì)菌生長，用“＋”表示；如試管內(nèi)透明清亮，
