番茄紅素對巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)控及其分子機(jī)制探討

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1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文番茄紅素對巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)控及其分子機(jī)制探討姓名：馮丹申請學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)指導(dǎo)教師：凌文華20100530◇中山大學(xué)博士學(xué)位論文番茄紅素對巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)控及其分子機(jī)制探討制細(xì)胞對炎癥因子和應(yīng)激反應(yīng)等方面也起著關(guān)鍵作用。NF，r,B是一個(gè)重要的轉(zhuǎn)錄因子，介入了免疫和炎癥反應(yīng)中多種基因表達(dá)的調(diào)節(jié)。MAPKs和NF一心均可被多種炎癥刺激因子所激活，引起炎癥信號(hào)通路的傳遞和炎癥反應(yīng)。Toll樣受體(Toll．1ikereceptor,TL鼬是目前研究發(fā)現(xiàn)并廣受關(guān)注的一種模式識(shí)別

2、受體，在宿主對微生物的防御機(jī)制和炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)中起重要作用。其中Toll樣受體4(TLR4)主要識(shí)別G‘細(xì)菌內(nèi)毒素脂多糖LPS和一些內(nèi)源性刺激物，介導(dǎo)炎癥信號(hào)的胞漿內(nèi)傳導(dǎo)。近年來不少研究顯示TLR4受體介導(dǎo)的炎癥信號(hào)通路參與了一些慢性炎性疾病如癌癥和心血管疾病的發(fā)病過程，選擇性的抑制TLR4通路的傳導(dǎo)可能會(huì)成為治療慢性炎性相關(guān)疾病的一個(gè)新的作用靶點(diǎn)。另外，在TLR4介導(dǎo)的炎癥信號(hào)通路傳遞中，細(xì)胞在受到刺激后，TLR4受體必需首先易位到脂筏處與髓樣分化蛋白．2(myeloiddifferentiation．2，MD．2)構(gòu)

3、成復(fù)合體，才能介導(dǎo)LPS或其它刺激因素誘導(dǎo)的下游炎癥信號(hào)通路的傳導(dǎo)和炎癥因子及介質(zhì)的生成。脂筏是細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層內(nèi)中富含鞘脂、膽固醇及特殊蛋白質(zhì)的質(zhì)膜微區(qū)，作為蛋白質(zhì)的相互作用募集平臺(tái)，脂筏在跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、跨細(xì)胞運(yùn)輸、細(xì)胞胞飲等過程中發(fā)揮著重要的作用，并在一些感染性疾病發(fā)生中也扮演著重要的角色，如干擾脂筏的完整性可能會(huì)影響一些致炎因子的生成。因而，對TLR4受體這一炎癥信號(hào)傳導(dǎo)通路中的最上游關(guān)鍵分子脂筏易位的調(diào)控將對降低機(jī)體炎癥反應(yīng)和防治炎癥相關(guān)性疾病均具有重要意義。流行病學(xué)研究提示植物性食品具有廣泛的促進(jìn)健康和防治腫瘤

4、、心血管疾病、糖尿病、肥胖等疾病的作用。其中，植物性食物中存在的大量植物化學(xué)物質(zhì)(phytochemicals)，它們也具有廣泛的生物活性作用和健康促進(jìn)作用，并逐漸受到人們的關(guān)注。番茄紅素是一種脂溶性的類胡蘿卜素，分子式為C40H56。作為一種天然色素番茄紅素廣泛存在于番茄、西瓜等蔬菜和瓜果中。流行病學(xué)研究資料顯示血漿中番茄紅素的水平與一些慢性疾病如心血管疾病和癌癥的發(fā)生率呈負(fù)相關(guān)。雖然番茄紅素對一些疾病的防治作用在一定程度上歸功于其強(qiáng)大的抗氧化作用，但近年來的研究證據(jù)顯示番茄紅素也可通過其它的一些作用途徑發(fā)揮機(jī)體保護(hù)

5、效應(yīng)。如最近研究發(fā)現(xiàn)番茄紅素除了具有抗氧化抗癌作用外，還能夠降低血漿膽固醇水平，具有抗增殖和保護(hù)血管內(nèi)皮等功能。炎癥反應(yīng)與一些慢性疾IV◇中山大學(xué)博士學(xué)位論文番茄紅素對巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)控及其分子機(jī)制探討病如動(dòng)脈粥樣硬化，癌癥發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。番茄紅素對炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用及其具體的作用靶點(diǎn)和分子作用機(jī)制目前尚不十分清楚，值得深入探討。RAW264．7細(xì)胞是一種鼠源性的巨噬細(xì)胞，可被外界刺激物如LPS激活釋放大量的炎癥因子和炎癥介質(zhì)而模仿體內(nèi)的炎癥反應(yīng)。因而，為了進(jìn)一步研究番茄紅素的生物學(xué)作用和作用靶點(diǎn)，本研究通過體外

6、建立LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)模型，探討番茄紅素抗炎效應(yīng)及分子作用機(jī)制，并進(jìn)一步明確它對一些慢性疾病防治的作用機(jī)理。研究方法1、番茄紅素對RAW264．7巨噬細(xì)胞中炎癥反應(yīng)的調(diào)控(1)番茄紅素對RAW264．7巨噬細(xì)胞毒性及活力的影響lrtM，5ttM，10IxM番茄紅素孵育RAW264．7巨噬細(xì)胞24h，分別采用2，4一二硝基苯肼比色法檢測培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(1actatedehydrogenase，LDH)含量，噻唑蘭(thiazoylbluetetrazoliumbromide，M，丌)法測定細(xì)胞增殖來評價(jià)番茄

7、紅素對RAW264．7巨噬細(xì)胞毒性及活力的影響。(2)番茄紅素對LPS誘導(dǎo)的RAW264．7巨噬細(xì)胞NO和IL．6生成的影響將RAW264．7巨噬細(xì)胞接種于24孔培養(yǎng)板，分別與1州，5rtM，10州番茄紅素預(yù)孵育lh，再加入1扯g／mLLPS孵育24h收集細(xì)胞培養(yǎng)液，分別采用亞硝酸鹽法和ELISA法檢測巨噬細(xì)胞NO和IL．6生成的水平。(3)番茄紅素對LPS誘導(dǎo)的RAW264．7巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)型～氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase，iNOS)和IL．6表達(dá)的影響將RAW264．7巨噬細(xì)胞

8、接種于6孔培養(yǎng)板，分別與llaM，5洲，10rtM番茄紅素預(yù)孵育lh，再與1lxg／mLLPS孵育6h收集細(xì)胞總RNA用于檢測iNOS和IL．6的mRNA表達(dá)量；或與11．tg／mLLPS孵育24h后收集細(xì)胞總蛋白，采用Westernblot方法檢測iNOS蛋白表達(dá)量。2、番茄紅素對巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)調(diào)控的分子機(jī)制的探討(1)番茄紅