當(dāng)歸注射液對大鼠心肌缺血再灌注損傷后FAK表達(dá)的研究

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1、當(dāng)歸注射液對大鼠心肌缺血再灌注損傷后FAK表達(dá)的研究【摘要】目的：觀察當(dāng)歸注射液對缺血再灌注損傷心肌細(xì)胞內(nèi)FAK的表達(dá)及臨床的意義。方法:將35只SD大鼠隨機(jī)分成4組(n=10):正常對照組(n=5);假手術(shù)組(n=10);缺血再灌注組(n=10);當(dāng)歸治療組(n=10),建立在體心肌缺血再灌注動物模型。實(shí)驗(yàn)完畢后，將各組動物心肌組織做免疫組織化學(xué)染色;觀察各組動物心肌細(xì)胞內(nèi)粘著斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)表達(dá)的變化。利用HPIAS2000圖像分析系統(tǒng)測定FAK在以上各組中表達(dá)的平均光密度和平均陽性面積率。結(jié)果：正常對照組：心肌細(xì)胞內(nèi)可

2、見大量的棕黃色顆粒沉積，F(xiàn)AK表達(dá)呈陽性;假手術(shù)組：心肌細(xì)胞內(nèi)可見一些棕黃色顆粒，F(xiàn)AK表達(dá)呈陽性;缺血再灌注損傷組：心肌細(xì)胞內(nèi)可見少量和未見棕黃色顆粒，F(xiàn)AK表達(dá)呈陰性;當(dāng)歸治療組：心肌細(xì)胞內(nèi)可見密集分布的棕黃色顆粒，F(xiàn)AK表達(dá)呈陽性。圖像分析結(jié)果顯示：正常對照組、當(dāng)歸治療組、假手術(shù)組與缺血再灌注損傷組之間FAK表達(dá)的平均光密度及陽性面積率的差異有顯著性意義(P<0.01);正常對照組與假手術(shù)組之間、當(dāng)歸治療組與假手術(shù)組之間FAK表達(dá)的平均光密度及陽性面積率的差異無顯著性意義(P>005)。結(jié)論：當(dāng)歸注射液對大鼠缺血再灌注損傷心肌細(xì)胞有重要的保護(hù)作用。

3、【關(guān)鍵詞】當(dāng)歸注射液;缺血再灌注;心肌;FAK缺血12再灌注損傷(Ischemiareperfusioninjury)或稱再灌注損傷,是指組織缺血一段時間,當(dāng)血流重新恢復(fù)后,細(xì)胞功能代謝障礙及結(jié)構(gòu)破壞反而較缺血時進(jìn)一步加重,器官功能進(jìn)一步惡化的綜合征[1]。缺血是供血障礙引起的組織供血不足的病理表現(xiàn),組織缺血導(dǎo)致的疾病稱缺血性疾病,是可以發(fā)生在多種組織器官上的常見疾病。再灌注是指組織缺血后恢復(fù)供血的過程,缺血再灌注實(shí)際上包括缺血和再灌注兩個方面,缺血是引起疾病的原因,也是再灌注的條件[2]。　　當(dāng)歸為傘形科(Umbrelliferae)植物的干燥塊根,藥性甘、辛

4、、溫,入肝、心、脾經(jīng),具有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤燥滑腸等功效[3]。當(dāng)歸中含有19種氨基酸,23種微量元素及維生素A、維生素B、磷脂等物質(zhì)[4]。當(dāng)歸的藥用價值早已為人們所認(rèn)識,其藥理作用主要是：①促進(jìn)機(jī)體免疫;②對呼吸系統(tǒng)的作用;③對血液循環(huán)系統(tǒng)的作用，有文獻(xiàn)報道[2]。冠心病患者應(yīng)用當(dāng)歸注射液治療能平衡和抑制血小板聚集的作用。當(dāng)歸具有鈣通道阻滯作用,拮抗鈣超載,對心肌缺血再灌注所致心肌損傷有保護(hù)作用。中藥對心肌缺血的治療有其獨(dú)特性和有效性，尤其是中藥具有毒副作用小、效果確切的特點(diǎn)[5]。近年來，有不少學(xué)者對中藥預(yù)處理對心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用進(jìn)行了研究與探索

5、?！　AK是一種非受體型酪氨酸激酶,與酪氨酸激酶2(prolinerichtyrosinekinase2,PYK2)及細(xì)胞黏著激酶β(cellularadhesion12kinaseβ,CAKβ)組成FAK家族[6]。FAK抑制細(xì)胞凋亡[7]。FAK是錨定依賴細(xì)胞的生存信號,腫瘤細(xì)胞FAK表達(dá)受到抑制時,可引起細(xì)胞凋亡。癌細(xì)胞FAK表達(dá)的升高,通過抑制錨定依賴狀態(tài)下的細(xì)胞凋亡而進(jìn)行不斷的生長[8]。FAK的高表達(dá)能使細(xì)胞外存活信號不斷放大,抑制腫瘤細(xì)胞失去細(xì)胞黏附后的失巢凋亡,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖和遷移?！　”緦?shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)方法觀察當(dāng)歸注射液對缺血/再灌注過程心

6、肌細(xì)胞內(nèi)FAK的表達(dá),探討當(dāng)歸注射液對心肌缺血/再灌注損傷的作用機(jī)理?！　?材料與方法　　1.1材料　　1.1.1動物模型制備及分組選用健康雄性Wistar大鼠(SPF級)35只,體重250～300g左右。腹腔注射戊巴比妥鈉4.5mg·(100g)-1,麻醉動物后行氣管切開接微型呼吸機(jī)人工呼吸[呼吸頻率60次·min-1,潮氣量2ml·(100g)-1],沿胸骨左緣第4肋骨開胸在左心室、右心室與左心房交界處結(jié)扎/開放左冠狀動脈前降支建立心肌缺血再灌注模型。將動物隨機(jī)分成4組:正常對照組(不做任何處理);假手術(shù)組(絲線穿過冠狀動脈前降支但不結(jié)扎);缺血再灌注損傷組(I

7、R)(缺血/再灌注前靜脈注射生理鹽水0.8ml/12kg，結(jié)扎左冠狀動脈前降支45min,再灌注120min);當(dāng)歸注射液預(yù)處理組(在結(jié)扎前20min，靜脈注射當(dāng)歸注射液0.8ml/kg,其它處理同缺血/再灌注組)?！　?.2主要試劑　　25%當(dāng)歸注射液(武漢大學(xué)中南醫(yī)院制藥廠);即用型兔抗鼠FAK單克隆抗體，即用型SP通用型免疫組織化學(xué)試劑盒，DAB顯色試劑盒及多聚賴氨酸。以上試劑均購于北京中山生物技術(shù)有限公司?！　?.3方法　　1.3.1常規(guī)HE染色取材、固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色?！　?.3.2免疫組織化學(xué)SP法檢測FAK相關(guān)抗原主要步驟