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《甘蔗與黑穗病菌互作的基因差異表達(dá)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文甘蔗與黑穗病菌互作的基因差異表達(dá)研究姓名：楊志霞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：作物栽培學(xué)與耕作學(xué)指導(dǎo)教師：陳如凱2003.5.1"蔗與黑穗病菌互作的基因差異表達(dá)研究摘要甘蔗黑穗病(UstilagoscitamJneaSyd．)是世界性的甘蔗病害，它在感病品種上所導(dǎo)致的巨大經(jīng)濟(jì)損失使得世界許多植蔗國家不得不淘汰一些豐產(chǎn)、高糖但感病的商業(yè)品種。
2、j
3、；I此，甘蔗抗黑穗病育種的研究是當(dāng)前甘蔗遺傳育種和生產(chǎn)實(shí)踐上急需解決的重大課題。為此，本研究旨在研究不同抗性類型甘蔗受甘蔗黑穗病侵染前后基因表達(dá)的差異而為甘蔗抗黑
4、穗病育種提供分子依據(jù)。實(shí)驗(yàn)中選用高抗品種NC0376和感病品種F134為供試寄主材料：蒸餾水處理植株作對(duì)照；以12個(gè)3’端錨定引物和8個(gè)5’端隨機(jī)引物構(gòu)成96個(gè)引物組合，運(yùn)用DDRT—PCR(differentialdisplayretrotranscriptation—PCR)技術(shù)以達(dá)到高效篩選差異基因。結(jié)果表明，有20個(gè)引物組合能擴(kuò)增出差異條帶，其中擴(kuò)增效果最好、得到差異帶多的隨機(jī)引物為ARP3、ARP4和ARPll，這些隨機(jī)引物可以和AP2、AP7、AP8錨定引物組成多個(gè)引物組合擴(kuò)增出差異條帶：錨定引物中擴(kuò)增效果最好
5、的是以CG或Gc結(jié)尾的AP2、AP7。共篩選出11條差異帶，其中，4條是NC0376互作后的表達(dá)差異帶，說明品種受病菌侵染后，mRNA表達(dá)豐度提高；6條是F134與病菌互作后表達(dá)的差異帶，1條未接種寄主所特有的，暗示有一個(gè)基因在感染黑穗病菌后關(guān)閉。對(duì)回收的11條差異帶進(jìn)行克隆測序，并在Genbank中進(jìn)行同源性比較，發(fā)現(xiàn)抗病品種NC0376接種后表達(dá)的(R11)cDNA片段與玉米、高粱的細(xì)胞色素氧化酶的同源性達(dá)100％；6個(gè)與玉米、小麥mRNA序列有同源性，其余3個(gè)未查到同源性，有可能是新基因的部分序列。對(duì)接種后抗病品種4
6、條差異片段R11、R12、R13、R14和感病品種一條差異表達(dá)片段SOl進(jìn)行半定量RT—PCR的初步驗(yàn)證，結(jié)果表明，R11、R12和R13差異片段為真實(shí)表達(dá)的差異片段，而R14和S01差異片段呈假陽性。關(guān)鍵詞：差異顯示：基因差異表達(dá)；甘蔗黑穗??；互作}f蔗弓黑穗病菌互作的基斟差異表達(dá)研究AbstractSugarcaneUstilagoScitamineaSyd(Smut)，causedbyUstilagoScitamineaSyd，isanworldwideseverediseaseofsugarcane(intersp
7、ecificSaccharumhybrids)．BecauseofthesevereeconomiclossesinSmutepidemics，manysugarcane—producingcountrieshadtoeliminatesomeofthehighyeild．highsugarcontent，howeversusceptibletradecultivars．SothebreedingofSmut～resistantsugarcanecultivarsisacrucialkeytopicinbothinheri
8、tanceandbreedingofsugarcaneandproductionpractice．ThisstudyselectedsugarcanesofdifferentresistancetypestodetectthedifferenceofgeneexpressionbeforeandaftertheywereinfecedbyYstilagoScltamineaSyd，thusaffordsmolecularbasisforsugarcane’sSmut—resistantbreeding．Thehigh—re
9、sistancesugarcanecultivar“NC0376”andthehigh—sensitivityORe“F134”wereselectedasexperimentalhostmaterialtobetreatedwithUstilagoScitamineaSydandthehealthy1inestreatedwithdistilledwaterwereselectedascontrolrespectively．Ninty—sixprimerpairsobtainedbyrandomconstitutionb
10、etweentwelve3’anchoredprimersandeight5’randomprimerswereutilizedandDDRT—PCR(differentialdisplayretrotranscriptation—PCR)wasexploitedtoachievehighefficen
