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1、碩士碩士學(xué)位論文張艷石栗accB石栗accB與accC基因全長(zhǎng)cDNA克隆與accC及表達(dá)分析基因全長(zhǎng)cDNA克隆及表達(dá)分析張艷2014二○一四年六月分類(lèi)號(hào)S792.99學(xué)校代碼10593*UDC633.8碩士學(xué)位論文石栗accB與accC基因全長(zhǎng)cDNA克隆及表達(dá)分析張艷學(xué)科專(zhuān)業(yè)作物栽培學(xué)與耕作學(xué)指導(dǎo)教師禤維言副教授論文答辯日期2014年5月學(xué)位授予日期2014年6月答辯委員會(huì)主席李榮柏研究員廣西大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)聲明本人聲明所呈交的論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的研究成果。除已特別加以標(biāo)注和致謝的地
2、方外，論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)的研究成果，也不包含本人或他人為獲得廣西大學(xué)或其它單位的學(xué)位而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同事對(duì)本論文的研究工作所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確說(shuō)明。本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下所完成的學(xué)位論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬?gòu)V西大學(xué)。本人授權(quán)廣西大學(xué)擁有學(xué)位論文的部分使用權(quán)，即：學(xué)校有權(quán)保存并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于：□保
3、密，在年解密后適用授權(quán)?！醪槐Ｃ堋?請(qǐng)?jiān)谝陨舷鄳?yīng)方框內(nèi)打“√”)論文作者簽名：日期：指導(dǎo)教師簽名：日期作者聯(lián)系電話：15077021601電子郵箱：380006773@qq.com石栗accB與accC基因全長(zhǎng)cDNA克隆及表達(dá)分析摘要石栗(Aleuritesmoluccana)是大戟科(Euphorbiaceae)的木本油料植物，其種子油脂含量很高，是一種很重要的生物質(zhì)能源植物。本試驗(yàn)克隆獲得石栗ACCase中BCCP(生物素羧化酶載體蛋白，biotincarboxylasecarrierprotein)亞基以及BC（bio
4、tincarboxylase，生物素羧化酶）亞基的編碼基因accB與accC的全長(zhǎng)cDNA序列，對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析，并通過(guò)半定量RT-PCR分析這兩個(gè)基因在石栗種子不同生長(zhǎng)時(shí)期中的表達(dá)變化，為今后篩選分子標(biāo)記或研究油脂合成相關(guān)酶基因提供參考。1．通過(guò)同源克隆法和RACE技術(shù)相結(jié)合，克隆得到了accB、accC這兩個(gè)基因的全長(zhǎng)cDNA序列，并推導(dǎo)出編碼區(qū)氨基酸序列。通過(guò)NCBI網(wǎng)站及相關(guān)軟件進(jìn)行分析比對(duì)。結(jié)果顯示，accB基因全長(zhǎng)cDNA序列大小為1170bp，編碼區(qū)長(zhǎng)度為798bp，編碼265個(gè)氨基酸。accB基因核苷酸序
5、列與基因庫(kù)中已注冊(cè)的油桐、麻風(fēng)樹(shù)的核苷酸酸序列的同源性依次為：93%和82%，其氨基酸序列與陸地棉、油梨、大豆、苜蓿、麻風(fēng)樹(shù)、油桐的BCCP亞基的氨基酸序列同源性分別為：91%、83%、68%、64%、61%、52%；accC基因全長(zhǎng)cDNA序列大小長(zhǎng)度為1607bp，編碼區(qū)長(zhǎng)度為1119bp，編碼372個(gè)氨基酸，accC基因核苷酸序列與油桐、麻風(fēng)樹(shù)和蓖麻的核苷酸酸序列的同源性分別為：97%、93%和91%，其氨基酸序列與麻風(fēng)樹(shù)、陸地棉、煙草、花生、大豆、擬南芥的BC亞基的氨基酸序列同源性分別為：96%、91%、89%、89%
6、、88%、83%。2．采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將種子總RNA反轉(zhuǎn)錄后，獲取了高質(zhì)量的cDNA。以cDNA為模板，石栗管家基因Actin作為內(nèi)參，通過(guò)半定量RT-PCR分析了石栗accB、accC這兩個(gè)基因在石栗種子內(nèi)不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)水平變化。在種子發(fā)育過(guò)程中accB基因與accC基因表達(dá)量大致情況是：六月份>七月份>五月份，同時(shí)油脂含量從五月份至七月份三個(gè)月間是持續(xù)上升的。得出結(jié)論：石栗種子油脂含量的升高與石栗accB、accC基因的表達(dá)變化有一定相關(guān)性。I關(guān)鍵詞：石栗；accB基因；accC基因；克?。槐磉_(dá)分析IIWhole-Se
7、quencecDNACloningandExprissionAnalysisofaccBandaccCGenefromAleuritesMoluccana(Linn.)WilldZhangYan（CollegeofAgriculture，GuangxiUniversity，Nanning530004，China）ABSTRACTAleuritesmoluccanaisakindofwoodyoilplantwhichbelongstoEuphorbiaceae.Itsseedscontainhighproportionofoi
8、l,whichmakesAleuritesmoluccanatobeanimportantbiomassenergyplant.Inthisexperiment,whole-sequencescDNAofaccBgeneandaccCgeneofacetylcoenzymeA
