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《多重PCR檢測豬瘟病毒、豬細小病毒、豬偽狂犬病病毒的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)碩士學(xué)位論文多重PCR檢測豬瘟病毒、豬細小病毒、豬偽狂犬病病毒的研究姓名：劉建柱申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：樸范澤2003.6.1縮寫詞CSFClassicalSwineFeverCSFVClassicalSwineFeverVimsPPVPorcineParvovirusPRPorcinepseudombiesPRVPorcinepseudombiesvirusFAfluorescentantibodyENDExaltationofNDVRTReverseTranscriptionPCRPolymeraseChainReactionAMVase
2、ReverseTraanscriptasefromAvianMyeloblastosisVirus豬瘟豬瘟病毒豬細小病毒·豬偽狂犬病豬偽狂犬病毒熒光抗體試驗雞新城疫病毒強化實驗反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)一種來自禽腦脊髓炎病毒的反轉(zhuǎn)錄酶SNserumneutralization血清中和試驗IliAindirecthemagglutination間接血凝試驗CTB--ELISAcomplextrappingblackingELISA復(fù)合捕捉封閉ELISAAC--ELISAantigen-．capture---ELISA抗原捕獲ELISAC．ELlSAcompetitiveenzyme·lin
3、kedimmunosorbentassay競爭ELlSADot．ELISA斑點．ELISAHAorHIhemagglutinationorHA．inhibition血凝(抑制)試驗CIEcountercurl'entimmunoelectrophoresis對流免疫電泳試驗LATlatexagglutinationtestt乳膠凝集試驗SECGASilver-enhancedcolloidalgoldassay銀加強膠體金技術(shù)IFimmunofluorescence免疫熒光體染色技術(shù)RIAradioimmunoassay放射免疫技術(shù)IDTimmunodiffusiontest免疫
4、擴散試驗cELlSAcompetitionenzyme．1inkedimmunosorbentassay競爭ELISAPCFIAparticleconcentrationfluorescenceimmunoassay顆粒濃縮免疫熒光試驗多重PCR檢測CSFV、PPV、PRV的研究摘要豬瘟、豬細小病毒感染、豬偽狂犬病是危害養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的一類重要的傳染病，每年均給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。為了減少這三種疾病給養(yǎng)豬業(yè)帶來的巨額經(jīng)濟損失，廣大獸醫(yī)工作者在過去的100多年里，建立了許多用于檢測和診師宣三種疾病的方法，但這些方法大多僅限于常規(guī)的免疫學(xué)和血清學(xué)檢測，只適用于流行病學(xué)調(diào)查，而不能夠
5、確定是否正處于感染狀態(tài)，并且都存在著敏感性差、特異性不強和，或耗時等缺點，無法滿足臨床上對豬瘟、豬細小病毒感染和豬偽狂犬病的診斷和檢鋇9需要。隨著分子生物學(xué)研究的不斷深入和PCR技術(shù)的出現(xiàn)，為動物傳染病的診斷和檢測提供了快速、敏感、特異和方便實用的方法。為此，本實驗研究和建立了豬瘟、豬細小病毒感染和豬偽狂犬病的多重PCR診斷和檢測方法，并對多重PCR擴增條件進行了優(yōu)化，對其特異性、敏感性以及臨床應(yīng)用進行了研究。為進一步在臨床上使用多重PCR方法診斷和檢測這三種豬繁殖障礙性疾病提供參考。，本研究首先在GeaeBank中查出CSFV、PPV、PRv的所有已知序列。對病毒各塞困區(qū)進行同
6、源性分析，確定CSFV的E2基因，PPV的VP2基因和PRV的譬Ⅱ基因作為各病毒擴增的靶序列。利用DNAsis對上述保守區(qū)進行引物設(shè)計．并利用DNAstar對設(shè)計出來的3種病毒引物進行引物二聚體化、同源性和互補性分析，以避免引物之間形成穩(wěn)定的引物二聚體和避免具有較高的同源性和互補性。最后確定了擴增片段為CSFV288bp、PPV575bp、PRV700bp的3種病毒的6條多重PCR引物。在此基礎(chǔ)上，分別進行了各病毒單重PCR的檢測，確定了各單重PCR擴增條件的范圍，建立了這三種病毒單重PCR診斷方法。結(jié)果在退火條件CSFV為50．1．61．1℃40s、PPV為52．8-61．1℃
7、啦s、PRV為56．2-62．2"C40s時的擴增效果為佳，電泳條帶清晰，雜帶較弱，可獲得較滿意的擴增結(jié)果：其他步驟的反應(yīng)條件以預(yù)變性舛℃3min、變性94℃30s、延伸72℃lmin、共30個循環(huán)、再經(jīng)延伸72℃5min后、于4"C10min終止PCR擴增為宜。利用優(yōu)化晤的PCR各擴增條件對各引物濃度、dNTP濃度進行優(yōu)化，結(jié)果引物濃度以CSFV1．o-1．75pmol／ml，PPV1．0-1．75pmol／ml，PRVO．75．1．75pmol／ml為宜；dNTP濃度以CSF
