資源描述：
《南極磷蝦胰蛋白酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、碩士學(xué)位論文南極磷蝦胰蛋白酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)研究Purificationandcharacterizationofthetrypsinfrom1n■●■lZupliaustasuperba學(xué)號：21018007完成日期：2013—06—08大連理工大學(xué)DaliallUniversityofTechnology大連理工大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明作者鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。盡我所知，除文中已經(jīng)注明引用內(nèi)容和致謝的地方外，本論文不包含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表的研究成果，也不包含其他已申請學(xué)位或其他用途使用過的成果。與我一同工作的同志對本研究所做的貢
2、獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說明并表示了謝意。若有不實(shí)之處，本人愿意承擔(dān)相關(guān)法律責(zé)任。學(xué)位論文肌缸弛邋讎邊逝絲叢逖逝醯作者簽名：——互盈墜蘭————一日期：監(jiān)年—魚_月乒日大連理工大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要南極磷蝦屬于甲殼動(dòng)物門真蝦總目的磷蝦目，因?yàn)樯钤谀蠘O洲水域而得此名。南極磷蝦資源十分豐富，生物量巨大。和大多數(shù)水生生物一樣，南極磷蝦具有自溶的特征，體內(nèi)存在十分高效的酶消化系統(tǒng)。該系統(tǒng)能夠迅速降解各種蛋白質(zhì)、多糖，所以說南極磷蝦是一個(gè)非常值得研究的蛋白酶源。因此從南極磷蝦體內(nèi)純化出一種新的蛋白酶具有重要的意義。本論文試圖從南極磷蝦體內(nèi)分離純化出一種胰蛋白酶，希望通過本研究建立起一套從南極磷蝦中分
3、離純化胰蛋白酶的方法，為今后科學(xué)研究和工業(yè)應(yīng)用奠定相應(yīng)的理論和應(yīng)用基礎(chǔ)。本論文還進(jìn)行了一些南極磷蝦胰蛋白酶酶學(xué)性質(zhì)的研究，如溫度、pH條件、金屬離子、蛋白酶抑制劑對該胰蛋白酶活性的影響。本文還研究了該純化酶的酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)常數(shù)和相關(guān)活性功能基團(tuán)，以期為今后該南極磷蝦蛋白酶的應(yīng)用和深入的理論研究提供基礎(chǔ)理論數(shù)據(jù)。南極磷蝦粗酶液經(jīng)過40．50％飽和度硫酸銨分級沉淀，DEAE．SepharoseFastFlow離子交換層析以及HiTrapBenzamidineFastFlow親和層析三步分離純化手段，最終得到一種電泳純胰蛋白酶，其亞基分子量為20．0kDa。該酶是一種中溫蛋白酶，其最適溫度在40
4、℃左右。但在相對較低的溫度25℃時(shí)，仍具有較高的酶活。但是該酶熱穩(wěn)定性較差。在低于40℃溫度范圍內(nèi)可以基本保持穩(wěn)定。該酶的最適pH在7．0左右，但在一個(gè)較寬的pH值范圍內(nèi)具有活性。同時(shí)該胰蛋白酶在偏堿的環(huán)境下比較穩(wěn)定，在酸性環(huán)境下酶活受到強(qiáng)烈抑制。M92+、Ca2+、K+對南極磷蝦胰蛋白酶活性都具有一定的激活作用，而A13+、Cu2+、Zn2+對該純化南極磷蝦胰蛋白酶活性有強(qiáng)烈的抑制作用。絲氨酸蛋白酶專一性抑制劑苯甲基磺酰氟以及胰蛋白酶專一性抑制劑苯甲脒對該純化南極磷蝦蛋白酶具有強(qiáng)烈的抑制作用，說明該蛋白酶是一種絲氨酸類胰蛋白酶。高濃度的EDTA對該酶也有一定的抑制作用，說明該酶可能具有某
5、些金屬蛋白酶的性質(zhì)。以BApNA為底物，該南極磷蝦胰蛋白酶的米氏常數(shù)(Km)和催化常數(shù)(k缸)分別為0．108mmol／L和2．62S～。組氨酸殘基、色氨酸殘基是構(gòu)成該胰蛋白酶酶活性中心的必需基團(tuán)。精氨酸殘基、氨基以及巰基可能與酶活性相關(guān)，但不是必需基團(tuán)。關(guān)鍵詞：南極磷蝦；胰蛋白酶；分離純化；動(dòng)力學(xué)常數(shù)；南極磷蝦胰蛋白酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)研究PurificationandcharacterizationofthetrypsinfromEuphausiasuperbaAbstractAntarctickrill(Euphausiasz妒e而口)isthekeyspeciesofantarc
6、ticecologicalsystemduetoitsabundanceandecologicalrelevance．Antarctickrillisashrimp．1ikecrustaceannotableforitsrapidautolysispost-mortemduetothepresenceofhighconcentrationsofproteolyticenzymes．Theefficientdigestionsystemisbasedonacombinationofenzymescontrolledbyinhibitors．Theefficiencyoftheseenzyme
7、sisclearlyvisualizedwhenthekrillpostmortemisautolyzed，duetothedisablingoftheinhibitorsystem．Asaresult，thepurificationofaproteasefromantarctickrillhassignificanttheoreticandpracticalimportance．Inthispaper，atrypsin
