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《小黃魚ACE抑制肽的分離純化鑒定及構(gòu)效關系研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、蔡麗麗小黃魚ACE抑制肽的分離純化鑒定及構(gòu)效關系研究摘要本文以小黃魚魚肉為原料，酶解法制取ACE抑制粗肽，然后經(jīng)過多步分離純化鑒定小黃魚ACE抑制肽，同時對ACE抑制五肽進行了構(gòu)效關系的研究，篩選得到新型ACE抑制肽，并研究其在細胞層面上的降壓機理，以期為ACE抑制肽的研究開發(fā)提供理論依據(jù)。小黃魚魚肉用胰蛋白酶酶解，經(jīng)過響應曲面(RsM)優(yōu)化，用RP．HPLC法測定得其體外ACE抑制活性，確定最優(yōu)工藝條件為：pH7．0，溫度50．09。C，時間16．44h，底物濃度5．57％，酶底比9．12‰。獲得的小黃魚ACE抑制多肽ACE抑制率達87．78％。以最佳酶解工藝條件下制得的小黃魚ACE
2、粗肽為原料，進行多步分離純化，純化步驟依次為：超濾(截留分子量3000Da)、SephadexG25分子篩層析和SephadexG10層析，并用LC．TOFMS鑒定活性最高組分，人工合成后測定其體；'bACE抑制活性。結(jié)果為：分子量小于3000Da的肽具有高ACE抑制活性，抑制率達98．1％，分離純化得到的組分3．3抑制率為69．49％，液質(zhì)鑒定得到兩個五肽，分別為HDHSE(IC50值=38．741lamolFL)和GENSQ(ICso值=65．377IJmol／L)。本研究收集文獻報道的63個ACE抑制五肽，用偏最小二乘回歸法建立起構(gòu)效關系(QSAR)模型，用留一法進行內(nèi)部驗證，小
3、黃魚ACE抑制肽進行外部驗證，并篩選出一種未報到的新型ACE抑制肽。結(jié)果如下：模型的交叉驗證相關系數(shù)Rev2為0．5752，且小黃魚ACE抑制肽活性的預測值和實驗值相差不大，有此可知，建立模型具有較強的預測能力。分析QSAR模型得出，ACE抑制五肽C．端起第一位氨基酸的電性參數(shù)和第二位氨基酸殘基疏水性指數(shù)對ACE抑制活性的影響起主要作用(正相關)。此外，運用模型預測出一種未見報道的新型ACE抑制肽——IWHDC，人工合成后測得其ICso值為19．179lunol／L。以QSAR模型篩選出的新型ACE抑制肽——IWHDC為原料，研究其對人臍靜脈內(nèi)皮細胞的影響，測定了不同濃度肽對細胞增殖的
4、影響，以及細胞在氧化模型中(加入H202)對NO、MDA釋放量和NOS、SOD活性的影響。結(jié)果表明，IWHDC可能通過抑制內(nèi)皮細胞增殖，提高SOD，eNOS活性，增加NO的釋放及降低MDA的釋放來發(fā)揮降壓功效，說明了IWHDC不僅能發(fā)揮ACE抑制作用，同時能促進體內(nèi)的抗氧化，協(xié)同進一步促進血管舒張作用。關鍵詞：小黃魚；分離純化；構(gòu)效關系；IWHDC；降壓機理U揚州大學碩士學位論文AbstractInthispaper,smallyellowcroakerwasusedasbasicmaterialswhichhydrolyzedtopreparedACEinhibitorypeptid
5、es．Thentheproductwasintroducedtopurifiedandidentified．Meanwhile，wemadeaQSARreaserchofACEinhibitorypentapeptidesandscreenedanovelACEinhibitorypeptide，alsouseditinantihypertensivemechanismresearchatthecelllevelwiththehopethatwecanprovideatheoreticalbasisontheresearchanddevelopmentofACEinhibitorype
6、ptides．Theeffectofprocessconditionsontheangiotensin·Iconvertingenzyme(ACE)inhibitoryofsmallyellowcroakerhydrolysedwithtrypsinwereinvestigatedusingresponsesurfacemethodology(RSM)．RP-HPLCmethodwasalsointroducedtomeasureACEinhibitoryactivityofhydrolysate．Resultsshowedthattheoptimalhydrolysisconditi
7、onswereasfollows：pH7．0，50℃ofhydrolysistemperature，16．5hofhydrolysistime，substrateataconcentrationlevelof5．6％andenzyme／substrateratioof9960．Theinhibitoryactivityofpeptidesobtainedundertheoptimalconditionswasupto87．36％．Thecrud
