米黑霉脂肪酶活性的高通量篩選方法及其固定化和應(yīng)用的研究

《米黑霉脂肪酶活性的高通量篩選方法及其固定化和應(yīng)用的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、⑨論文作者簽名：卅指導(dǎo)教師簽名：論文評閱人1：評閱人2：評閱人3：評閱人4：評閱人5：答辯委員會主席：委員1：委員2：委員3：委員4：委員5：答辯日期：圣!!!璽塑蘭旦Author’Ssignature：一‘●‘bupervisor7Ssignature：Thesisreviewer1：Thesisreviewer2：Thesisreviewer3：Thesisreviewer4．Thesisreviewer5：Chair：(Committeeoforal㈣Committeeman1：Committeeman2：Committeeman3：Commit

2、teeman4．Committeeman5：Dateoforaldefence：浙江大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得浙江太堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：孑丹簽字日期：≥汐72年弓月歹日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解浙婆太堂有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交本論文的復(fù)印

3、件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)浙江太堂可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名：乏只導(dǎo)師簽名：簽字日期：翮≯年弓月<日簽字日期：’一，日浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文致謝致謝本課題是在我導(dǎo)師于教授(于洪巍)的悉心指導(dǎo)下完成的。記得剛進(jìn)實驗室的時候，于老師跟我說人生經(jīng)歷就是一種財富，人應(yīng)該踏踏實實的做事情，只要努力自然就會有回報。這像一盞指明燈，教我如何應(yīng)對人生。在最初選題、解決課題問題、購買儀器、撰寫文章與修改等事情上，都得到

4、了于老師殫精竭慮的幫助和支持。從他身上學(xué)到的認(rèn)真嚴(yán)謹(jǐn)、盡心盡責(zé)、刻苦努力、不折不撓的精神對我今后的個人發(fā)展起到了重要作用。在生活中，于老師更像一名慈父，對我們關(guān)懷備至，讓我們有了一個大家庭的感覺。感謝王博師兄在實驗和生活方面給予我的認(rèn)真指導(dǎo)和幫助，在他的協(xié)助下解決了我許多入門時的疑惑，并在我發(fā)表論文的撰寫與修改上提供了許多寶貴意見。感謝一直在我身邊陪伴我的王玨同學(xué)，不論發(fā)生什么事情都能理解我、幫助我，她的細(xì)心和努力很值得我學(xué)習(xí)，我們相處很愉快。感謝劉擊、劉敏、麻靜波、姜靈、顧佳黎、陸文強(qiáng)、呂小妹、徐紅娜、魏笑蓮、劉悅以及新和成公司職員張兵、費云舟、何帥

5、偉，感謝你們一同營造了良好的實驗室氛圍，伴我度過了一段愉快且有意義的科研生活。感謝室友和身邊的朋友們對我的照顧和關(guān)懷，使我度過一個又一個愜意的周末。最后，感謝我父親母親等家人對我的支持和關(guān)愛!王丹2012年1月10日浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要摘要脂肪酶即甘油酯水解酶，是一類專門水解油脂的酯酶。脂肪酶廣泛應(yīng)用于化學(xué)合成、食品、醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)保和能源開發(fā)等領(lǐng)域。其中來源于真菌米黑霉的脂肪酶RML(RhizomucormieheiLipase)是1，3．位專一性的脂肪酶，可以有效得制備各類油脂。在本文中，首先介紹了檢測脂酶活性的幾種方法及RML的一些酶學(xué)特性。其

6、中p-NPP法只適合檢測低酶活的脂酶；醋酸銅法和堿滴定法各有優(yōu)缺點，但都適于檢測脂酶酶活。RML在溫度35．38oC，pH8．10之間表現(xiàn)出較好的活性。Cu2+抑制RML的活性，而Ca2+和M92+都能促進(jìn)RML的活性。其次，開發(fā)了一種以橄欖油為催化底物的高通量篩選方法，并用于脂肪酶RML的定向進(jìn)化。這個高通量方法的原理是利用脂肪酸和氯化鈣反應(yīng)生成可以通過pH指示劑檢測的鹽酸。與傳統(tǒng)的p-NPP法比較，這個新方法展現(xiàn)了很多的優(yōu)點：首先反應(yīng)真實底物的活性；其次克服了p-NPP方法只能檢測低酶活的缺點。新方法篩選出的突變酶，通過滴定法及液相檢測，發(fā)現(xiàn)活性確

7、實有所提高，而用P．NPP法篩選出的突變酶卻不完全一致。通過運用該方法，RML經(jīng)兩輪定向進(jìn)化后，我們成功篩選到酶活提高了5倍的優(yōu)勢菌。另外，脂酶的酯化活性也會隨著水解活性提高。脂酶RML的1，3．位專一性沒有改變。磁性納米顆粒因其生物相容性、穩(wěn)定性、特殊磁性和比表面積大而受到廣泛的關(guān)注。通過丙烯酸乙酯與磁性Fe304的共聚反應(yīng)，建立了一個在磁性納米載體上共價結(jié)合固定化酶的方法。因為這個方法利用疊氮基固定化酶，不接觸任何化學(xué)物質(zhì)，所以避免了酶失活等問題。每克Fe304酶的裝載量達(dá)到250毫克，而且保留活性為100％左右。即使重復(fù)使用10次，活性仍不變。l

8、，3．甘油二酯(1，3．DAG)由于其廣泛用途，尤其是對身體健康方面的作用而日益受到人們的重視