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《EpCAM基因啟動子區(qū)CpG島甲基化狀態(tài)與基因表達關系研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、中山大學博七學位論文中文摘要EpCAM基因啟動子區(qū)CpG島甲基化狀態(tài)與基因表達關系研究TherelationshipofCpGislandmethylationstatusinEpCAMgenepromoterandgeneexpression專業(yè)：人體解剖學與組織胚胎學博士研究生：于國龍導師：何蘊韶教授中山大學基礎醫(yī)學院人體解剖學教研室中文摘要上皮細胞黏附分子(EpCAM)是細胞膜表面的一種糖蛋白，是利用單克隆抗體17-1A發(fā)現(xiàn)的人類腫瘤細胞表面抗原分子之一，其主要功能是參與細胞基底膜之間的同源黏附。上皮
2、來源的腫瘤細胞中表達明顯增強。作為細胞表面主要抗原，上皮細胞黏附分子作為免疫治療靶分子引起了廣泛的重視，在臨床上試驗研究中，將EpCAM抗體對結腸癌腫瘤病人進行治療，有效減少術后的死亡率。在1995年，德國已經允許上皮細胞黏附分子的抗體應用于臨床，治療結腸癌晚期手術病人。上皮細胞黏附分子基因不僅同上皮組織的發(fā)生發(fā)展有關，而且該基因在腫瘤中高表達，與腫瘤的預后也密切相關。研究發(fā)現(xiàn)，上皮細胞黏附分子在上皮來源的多種腫瘤中都出現(xiàn)高表達，但高表達原因不清。對上皮細胞黏附分子基因上游序列分析發(fā)現(xiàn)，它的啟動子沒有一個典
3、型的啟動子所具有的TATA盒。對該基因啟動子功能研究的文獻中，以對啟動子功能和區(qū)域定位研究為主，主要分析上皮細胞黏附分子基因啟動子的啟動能力、啟動子具體的范圍大小。至于該基因在腫瘤中為什么出現(xiàn)高表達，尚沒有相關報道。目前，在對腫瘤的研究中，引起重視的～個方面是腫瘤表觀遺傳學的改變；這種改變主要為DNA修飾和組蛋白的修飾，這種表觀遺傳學改變并沒中山大學博士學位論文中文摘要有DNA堿基序列的改變，但是卻可以引起基因表達的改變。表觀遺傳學的改變引起的基因表達的改變主要表現(xiàn)在三個方面：DNA修飾，組蛋白修飾和RNA
4、干擾。目前腫瘤表觀遺傳學的研究中以DNA甲基化和去甲基化為研究的熱點之一。在腫瘤的發(fā)生中，出現(xiàn)基因組的整體去甲基化，和部分區(qū)段的高甲基化，這些高甲基化和低甲基化都可以出現(xiàn)在基因啟動子區(qū)域的CpG島。抑癌基因啟動子區(qū)域的CpG島甲基化之后，會出現(xiàn)基因表達的降低，甚至失表達，抑制腫瘤發(fā)生的功能降低，從而導致腫瘤的發(fā)生；反之，在一些癌基因啟動子區(qū)域的CpG島出現(xiàn)去甲基化后，卻可以誘導基因表達增高，進一步加快腫瘤的發(fā)生發(fā)展。上皮細胞黏附分子基因，在正常的消化道上皮表達較低甚至不表達，但是在上皮出現(xiàn)異常增生和永生化時
5、，該基因卻出現(xiàn)表達的異常增高。目前研究表明EpCAM基因對于腫瘤的發(fā)生具有促進作用，可以上調c．myc癌基因的表達。研究表明：抑制上皮細胞黏附分子基因的表達可以有效抑制腫瘤的生長；對于結腸癌的來說，EpCAM分子的抗體，可以有效的治療腫瘤，說明該分子在腫瘤的發(fā)生中有著重要作用。但是該基因在腫瘤中高表達的機制仍然不清。該基因的高表達，是否也存在表觀遺傳學的改變?在該基因啟動子區(qū)是否存在CpG島?該基因的表達是否有關?我們首先通過網絡數(shù)據(jù)庫，查找上皮細胞黏附分子基因轉錄起始位點上游1500bp和下游1000bp
6、的基因序列，通過網絡數(shù)據(jù)庫分析該段基因序列，發(fā)現(xiàn)在該段基因序列中確實存在著一個CpG島，并且跨度較長，但是對于其在腫瘤中甲基化狀態(tài)研究以及和基因表達的關系未見相關報道。在本研究中，通過BSP(bisulfitesequencingPCR)技術，分析在上皮細胞黏附分子高表達和不表達細胞中該基因啟動子區(qū)域的甲基化狀態(tài)，研究CpG島甲基化和該基因表達的關系和CpG島的甲基化狀態(tài)，探討上皮細胞黏附分子在腫瘤中高表達的機制，為開發(fā)甲基化分子診斷的試劑盒提供理論依據(jù)。第一章：EpCAM基因概述及啟動子區(qū)CpG島甲基化狀
7、態(tài)分析本章主要介紹了EpCAM的一般情況。首先介紹EpCAM基因家族，和EpCAM基因定位。EpCAM的結構和在細胞膜上的分布。其次簡單介紹了EpCAM在不同組織中的表達情況，以及在胚胎發(fā)育中EpCAM基因的表達改ll中山大學博士學位論文中文摘要變。EpCAM作為腫瘤預后因子，和腫瘤分類的分子標志的意義。最后我們根據(jù)網絡資源，查找EpCAM基因啟動子區(qū)域的基因序列，然后進行啟動子區(qū)域的CpG島的分析。通過兩個不同的網絡數(shù)據(jù)庫對EpCAM基因的啟動子區(qū)域核酸序列進行分析后發(fā)現(xiàn)：在EpCAM基因啟動子區(qū)域確實存
8、在著一個較長的CpG島，并且該CpG島，橫跨第一外顯子部分，一直延伸到第一內含子部分。根據(jù)這兩個數(shù)據(jù)庫分析顯示，在EpCAM基因啟動子區(qū)域CpG島的主要部分互相符合，表明在該段CpG島的甲基化可能同EpCAM基因的表達具有相關性。根據(jù)對EpCAM基因啟動子研究的文獻，EpCAM基因啟動子主要功能區(qū)在該基因上游．687bp范圍以內，我們在分析EpCAM啟動子區(qū)域CpG島的研究范圍時選擇該基因上游至基因中的-492．
