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《畢撥明寧堿二氫畢撥明寧堿抑制SKNSH細(xì)胞Aβ產(chǎn)生及作用機(jī)制研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、山東大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要第一部分畢撥明寧堿／二氫畢撥明寧堿通過抑制SK-N．SH細(xì)胞APP的表達(dá)抑制Ap的產(chǎn)生目的：阿爾茨海默病(Alzheimer’Sdisease，AD)是一種逐漸進(jìn)展的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，其特征為逐漸加重的癡呆和認(rèn)知功能的障礙。AD最為顯著的組織學(xué)特征為大腦皮質(zhì)細(xì)胞外出現(xiàn)由D類淀粉多肽(amyloidp，Ap)積聚構(gòu)成的老年斑(senileplaques，sP)。p淀粉樣前體蛋白(amyloidprecursorprotein，APP)是一種I型跨膜糖蛋白，APPf圣_J3分泌酶和丫分泌酶水解
2、能夠產(chǎn)生Ap。p分泌酶和丫分泌酶是APP水解產(chǎn)生Ap的關(guān)鍵酶，能夠調(diào)控AD的產(chǎn)生。以往研究發(fā)現(xiàn)中藥海風(fēng)藤提取成分畢撥明寧堿／二氫畢撥明寧堿能有效抑制人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SK-N．SH細(xì)胞)的APP的蛋白表達(dá)水平，但是該藥是否能夠最終影響AD的水平以及p分泌酶和丫分泌酶的活性，需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)。本實(shí)驗(yàn)著重研究中藥海風(fēng)藤提取物畢撥明寧堿／--氫畢撥明寧堿能否抑制SK-N．SH細(xì)胞的A13產(chǎn)生和藥物對(duì)p分泌酶和丫分泌酶的影響，以及藥物可能的作用機(jī)制。方法：用生藥學(xué)的萃取和層析方法從中藥海風(fēng)藤中提取了畢撥明寧堿／--氫畢撥明
3、寧堿(1：0．8)成分，然后用濃度3．13pg／mL，6．25pg／mL和12．50肛g／mL的畢撥明寧堿／二氫畢撥明寧堿處理SK-N—SH細(xì)胞22小時(shí)。之后，分別采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性和乳酸脫氫酶(1actatedehydrogenase，LDH)釋放法檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞毒性的影響。采用WesternBlot法檢測(cè)SK-N．SH細(xì)胞Ap42和Ap40多肽的表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)檢測(cè)Sl(-N-SH細(xì)胞A1342和AD40的產(chǎn)生的濃度。另外，采用
4、WesternBlot法檢測(cè)APP、Noah胞內(nèi)區(qū)多肽(Notchl)和D．位APP切割酶(BACE．1)蛋白的表達(dá)。同時(shí)，采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)SK-N．SH細(xì)胞Ap42的表達(dá)。另外，采用熒光分析法檢測(cè)藥物對(duì)SK-N．SH細(xì)胞p．分泌酶和丫．分泌酶活性的影響。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)濃度的畢撥明寧堿／--氫畢撥明寧堿(3．13“g／mL，6．25llg／mL和12．50肛g／mL)和O．I％DMSO對(duì)SK-N—SH細(xì)胞的活性無明顯影響，無明顯的細(xì)胞毒性儼>0．05)。實(shí)驗(yàn)濃度的畢撥明寧堿／二氫畢撥明寧堿(3．13
5、lLLg／mL，6．25I_tg／mL和l2．50弘咖L)能有效抑制SK-N-SH細(xì)胞APP蛋白的表達(dá)和6山東大學(xué)博士學(xué)位論文減少A脅和A]340肽的產(chǎn)生(尸0．05)。實(shí)驗(yàn)濃度的畢撥明寧r婀i／--氫畢撥明寧堿對(duì)Sl㈧．SH細(xì)胞的p．分泌酶和丫-分泌酶的活性無明顯影響
6、(P>O．05)。結(jié)論：實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示濃度為3．13pg／mL，6．25}Lg／mL和12．50pg／mL的畢撥明寧堿／二氫畢撥明寧堿復(fù)合物能有效的通過抑制APP蛋白的表達(dá)，減少SK-N—SH細(xì)胞Afl42和A脅多肽的產(chǎn)生。各濃度的畢撥明寧堿／二氫畢撥明寧堿不能影響SK-N．SH細(xì)胞的D．分泌酶和P分泌酶的表達(dá)和活性。關(guān)鍵詞：Alzheimer?。活惖矸矍绑w蛋白；B類淀粉多肽；13-分泌酶；丫．分泌酶；畢撥明寧堿；二氫畢撥明寧堿；海風(fēng)藤第二部分畢撥明寧堿，二氫畢撥明寧堿抑制SK-N—SH細(xì)胞p類淀粉前體蛋白基因啟動(dòng)子主要
7、啟動(dòng)調(diào)控區(qū)蛋白結(jié)合活性及機(jī)制研究目的：Alzheimer病(Alzheimer’sdisease，AD)雖P阿爾茨海默病，又稱老年性癡呆，是一種逐漸進(jìn)展的神經(jīng)變性疾病。AD最為顯著的組織學(xué)特征為大腦皮質(zhì)細(xì)胞外出現(xiàn)由p類淀粉多肽(amyloidp，AJ3)構(gòu)成的老年斑。p淀粉樣前體蛋白(amyloidprecursorprotein，APP)經(jīng)p分泌酶和丫分泌酶水解能夠產(chǎn)生Ap。彳即基因定位于人類21號(hào)染色體2區(qū)l帶，么即基因的表達(dá)主要由其啟動(dòng)子調(diào)控，還受到激活蛋白．1(activatorprotein．1，AP．1)和
8、白介素一1(interleukin．1，IL-1)的調(diào)控。在彳即的啟動(dòng)子內(nèi)，起主要作用的是彳艘基因的啟動(dòng)調(diào)控區(qū)(proximalpromoterregion,PPR)，位于其翻譯起始位點(diǎn)上游一46至．1堿基之間。在彳胛的PPR區(qū)內(nèi)有7個(gè)堿基也同時(shí)為AP．1的結(jié)合位點(diǎn)(TGACTCG)，能夠接受AP．1的調(diào)節(jié)。夏文等采用RT-PCR
