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《調控小麥抗逆相關基因的轉錄因子的克隆》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文調控小麥抗逆相關基因的轉錄因子的克隆姓名：曹麗霞申請學位級別：碩士專業(yè)：作物遺傳育種指導教師：馬慶;馬有志2003.5.1摘要對生長lO天左右的小麥幼髓進行干旱誘鼯，處理2小時后。取幼葉提取mRNA，分別構建了GAL4cDNAAD融合表達文庫和cDNA文厙。[GAL4cDNAAD融合表達文庫的滴度為1×106pfia／ml，隨機挑取103個重組克?。河孟拗菩詢?nèi)切酶EcoRl、Xhol漤訖，統(tǒng)計分毫蓐結果表明撼入片段在200--6000bp之闋，平均插入片段大小為2000bpoJ秘粥酵母革雜交體系迸彳亍篩選，
2、得到一個長度為1608bp的克隆Y82。經(jīng)Nd3I比較分析，該蛋囪具有完整的開放讀碼框，長度為762bp，編碼254個氨基酸，與植物的蛋白激酶商很高的同源性。BLAST分析表明，Y82與玉米的蜜食亮氨酸序列的跨膜蛋白激酶ltk2的間源性為76％，與大豆類簧鑫受彝激酶RLKt夔同添靛楚67％，與羧南芬豹綴瓣毽結合受露綴鑫激酶wakl基因的同源性為65％，并且具有富含亮氨酸的序列。由此可以推測Y82可能是一個受體蛋白激酶類似物。在GeneBank中檢索，結果展示在小麥中尚未發(fā)現(xiàn)與Y82有較高閽源性的序列。RLKl激酶在干旱、高鹽及低溫引
3、起的水分脅追的感受葶器售號傳遴中起關鍵終髑，因踅，本戮究發(fā)理豹小麥類受薅蛋鑫激薅可能在求分脅追的感受和信號傳遞中起作用，對了孵小麥逆境信號的感受幫傳遞機制有一定意義。／cDNA文庫的滴度為1×106pfulml。用引物WAPF和WAPR擴增小麥贅因組Ⅸ《、A，得到一條特黲條帶，約180bp。用此特黲帶終搽針篩選eDNA文瘁，繁一次簿選褥爨44個鞠瞧亮建，將簿逡繕餮靜鬻譙究隆分囊強浚螽迸孝亍第二次篩選。經(jīng)過兩輪篩選得到一個長度為3500bp左右的黨隆W6。BLA8T分析表明，W6與水稻的EREBP型轉錄因子基因有52％的同源性，與煙草
4、DRE結合蛋臼因子的同源性為43％，并具有轉錄因子的保守域。j～，一一關鍵瀨：小麥：干攀；eDNA文霹：酵母單雜交；原位雜交jCloningofTranscriptionFactorRegulatingStress。ReponsiveRelatedGeneAbstraetAGAL4ADcDNAfusionexpressionlibraryandaphageeDNAlibrarywereconstructedusingmRNAisolatedfromwheatseedlingleat"dehydratedfor2hours．Theti
5、teroftheGAL4eDNAexpressionlibraryiS1×100pfu／ml，and103positiveclonesselectedrandomlyweredigestedwithEcoRIandXhoItoevaluatethequalityofcDNAlibrary．Thesizeoftheinsertedsegmentrangesfrom200to6000bDwithanaverageof2000bp．Theyeastone·hybridsystemwasappliedtoscreentheGAL4eDNAl
6、ibrary，OnepositiveeDNAcloneWaSnamedY82．SearchingthedatabaseusingtheaminoacidsequenceofY82revealedt11atthehomologybetweenY82andpl'antsprotein16naseishigh．Thededueedproteinsequencecontainsacompleteopenreadingfl'alne(oRF)of762bpencoding254aminoacids．BlastanalysisWasperfor
7、medagainstdatabasesinNCBI，andtheresultshowedthatthehomologyiS76％betweenY82andprotein16nase(Zeamays)withleueine·richrepeattransmembraneproteinkinase2(1tlo)，67％Glycinemaxreceptor-likeproteinkinaseI(RLKl)．a(chǎn)nd65％Arabidopsisthalianawall-aSsociatedreceptor16naSegenes(wakl)．T
8、heY82wasconsideredasaproteinkinase-likegene．ExpressionofRLKlwasinducedbyLowtemperature，drought，andhighsalinity,andRLK
