松材線蟲的早期診斷、快速檢測技術(shù)及松材線蟲與擬松材線蟲的差異蛋白質(zhì)組研究

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1、松材線蟲的早期診斷、快速檢測技術(shù)及松材線蟲與擬松材線蟲的差異蛋白質(zhì)組研究摘要松材線蟲(Bursaphelenchusxylophilus)是松材線蟲病的病原,它是包括我國在內(nèi)的許多國家重要的林業(yè)病害,也是許多國家的重要檢疫對象,在我國屬于二級檢疫對象,每年造成的生態(tài)與經(jīng)濟損失難以估計。但是因為它和致病性弱的擬松材線蟲佃.mucronatus)在形態(tài)上極其相似,在顯微鏡下難以區(qū)分,這給松材線蟲的檢疫和防治帶來了很大的困難。本研究著眼于對松材線蟲的快速檢測和早期診斷技術(shù)進行改進與完善,建立了適用于松材線蟲的口岸

2、檢疫、林木防疫與監(jiān)測的體系與方法;并開展了松材線蟲與擬松材線蟲的差異蛋白質(zhì)組研究。本研究建立了基于快速分離器與分子檢測方法的松材線蟲快速檢測體系,最快可以在90min內(nèi)完成從樣品分離到得到鑒定結(jié)果的全過程,快速靈敏高效,大大縮短了檢驗檢疫所需的時間,適合口岸快速通關(guān)的需要;基于松材線蟲病早期檢測管與Y型等長雙鏈探針.實時熒光PCR快速檢測技術(shù)的松材線蟲病早期診斷體系,可以有效、及早地發(fā)現(xiàn)還處于感染早期尚未出現(xiàn)明顯病癥的松木,有利于及時清除傳染源,防止疫情擴散;建立了應(yīng)用熒光PCR技術(shù)檢測松墨天牛所攜帶的線蟲

3、情況的體系與方法,因而使在誘捕松墨天牛并調(diào)查其所攜帶線蟲情況時所遇到的蟲體腐爛而難以鑒定的難題得到解決;首次運用雙向電泳與MALDI.TOF.MS/MS蛋白質(zhì)組學(xué)手段,對松材線蟲和擬松材線蟲的差異蛋白質(zhì)組進行研究,研究認(rèn)為兩種線蟲在代謝途徑、信號調(diào)控機制和胞質(zhì)轉(zhuǎn)運機制上都存在著一定差異,支持松材線蟲是唯一病原病的理論,并對松材線蟲的致病機理進行了初步探討。該研究也為進一步的松材線蟲血清學(xué)檢測鑒定和致病機理研究打下基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞:松材線蟲;檢測;差異蛋白質(zhì)組廈門大學(xué)2008年碩士學(xué)位論文AbstractPine

4、wiltdiseaseisoneofthemostimportantpinetreediseases,anditscausalagentispinewoodnematode(Bursaphelenchusxylophilus,PWN)whichisagreatthreattothepineforestsofmanycountriesandhascausedgreateconomiclosseveryyearaswellasimponderableecologicaldamage.Thus,B.xylophi

5、lusisaquarantineorganismatthetopofthelistofthepathogenicspeciesinmanycountries,andalsolistedonA2inChina.However,itisdifficulttodifferentiateB.xylophilusfromtheclosely—relatedspeciesB.mucronatus,whichisnotpathogenictopinetreesundermicroscopefortheirmorpholo

6、gicalsimilarity,whichmakesthequarantineandpreventionverydifficulttoperform.Inthisstudy,wefocusedontheimprovementoftherapiddetectionandearlydiagonosistechniquesofB.xylophilus,anddevelopedseveralapplicationsystemsandmethodsforportquarantineandpineforestmanag

7、ement.WealsocarriedondifferentialproteomeanalysisofB.xylophilusandB.mucronatus.UsingtheRapidIsolatingMachineandmoleculardetectionmethods,anapplicationsystemforrapiddetectionofpinewoodnematodesWaSdeveloped,whichtookonly90mintogothroughthewholeprocedurefromn

8、ematodesamplecollectingtothefinalidentificationresult.Thisspecificandsensitivesystemwouldgreatlysavequarantinedetectiontimeandsavetheclearancedelayforcargoes.Combiningearlydiagnosistubeandequal··lengthdouble—

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