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《骨髓基質(zhì)干細(xì)胞移植修復(fù)椎間盤退變的實(shí)驗(yàn)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文骨髓基質(zhì)干細(xì)胞移植修復(fù)椎間盤退變的實(shí)驗(yàn)研究姓名：高錦申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：常楚20070801·英文縮略語(yǔ)·6中國(guó)醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他入已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明并表示謝意．申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作
2、者簽名／縊日期：坦z竺：』中國(guó)醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解中國(guó)醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即：研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬中國(guó)醫(yī)科大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位為中國(guó)醫(yī)科大學(xué)，且導(dǎo)師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國(guó)醫(yī)科大學(xué)．學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱．學(xué)校可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容(保密內(nèi)容除外)，以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名簪．，壤毽，、日期：盈9：壘!』·中文論著摘要·骨髓基質(zhì)干細(xì)
3、胞移植修復(fù)椎間盤退變的實(shí)驗(yàn)研究目的椎間盤退變性疾病是腰背痛的主要原因，也是骨科最常見多發(fā)病。椎間盤發(fā)生退變后，間盤內(nèi)最重要的變化是髓核內(nèi)的膠原減少和蛋白多糖濃度的降低。目前針對(duì)此類疾病的治療方法有保守治療和外科手術(shù)治療等，但都有一定缺陷。而利用人自體椎間盤細(xì)胞、軟骨細(xì)胞或干細(xì)胞移植到椎間盤，移植后能產(chǎn)生新的細(xì)胞外基質(zhì)，以此來(lái)逆轉(zhuǎn)椎間盤退變的過程是新的研究方向。隨著對(duì)干細(xì)胞的研究逐漸深入，我們認(rèn)識(shí)到骨髓基質(zhì)干細(xì)胞具有多向分化的潛能。本課題通過培養(yǎng)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，驗(yàn)證了其來(lái)源充足，取材方便，擴(kuò)增能力確切的各項(xiàng)優(yōu)點(diǎn)。為此，我們采用纖維環(huán)穿刺法制造大鼠尾椎
4、間盤退變模型的方法，然后將干細(xì)胞注入退變椎間盤中，通過實(shí)驗(yàn)對(duì)照，觀察骨髓基質(zhì)干細(xì)胞移植到大鼠退變的椎間盤后阻逆或修復(fù)椎間盤退變的效果。方法本實(shí)驗(yàn)利用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，將大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞白骨髓血中分離、純化和培養(yǎng)，先選用2周齡大鼠斷頸處死，取其脛骨、股骨，并去除兩干骺端，PBS沖洗髓腔，收集沖洗液，放入等體積的淋巴細(xì)胞分離液，吸取中間乳白色層面細(xì)胞懸液，與5倍體積的PBS混合后，離心，獲取2×106／ml，放于20％DMEM培養(yǎng)液中，置入37℃、飽和濕度、596C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)，24h后換液，72h后細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)基(細(xì)胞生長(zhǎng)融合達(dá)到8096～909
5、6)，每3天換液，i傳4分瓶，此為傳一代，取第3～4代作為注射用。并制成單細(xì)胞懸液，進(jìn)行干細(xì)胞的貼壁率檢測(cè)。從中選取3代生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞，進(jìn)行骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察和生物學(xué)性能鑒定。將wistar大鼠隨機(jī)分成四組：正常組(A組)、模型組(B組)、模型組+干細(xì)胞／藻酸鹽組(C組)、模型組+藻酸鹽組(D組)。每組九只大鼠，每組分二周組、四周組、八周組三個(gè)亞組，平均每亞組三只大鼠。制造大鼠尾的椎間盤退變模型(B組)：顯微鏡下用21號(hào)針頭穿刺破壞纖維環(huán)并抽吸髓核組織。c組：在椎問盤穿刺抽吸髓核組織后立即注入干細(xì)胞／藻酸鹽復(fù)合物，細(xì)胞濃度為1x106／
6、ml。D組：在椎間盤穿刺抽吸髓核組織后立即注入單純等量的藻酸鹽作為C組的對(duì)照。觀察骨髓基質(zhì)干細(xì)胞在植入椎間盤后是否能夠延緩或修復(fù)椎間盤退變。分別于2、4、8周觀察大鼠尾椎間盤組織形態(tài)學(xué)變化，免疫組化法測(cè)定纖維環(huán)組織中I型膠原的變化。結(jié)果1、原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)顯示大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞具有活躍的增殖倍增能力。2、組織學(xué)檢測(cè)顯示A組椎間盤結(jié)構(gòu)形態(tài)正常：椎間盤高度正常，纖維環(huán)排列整齊，髓核結(jié)構(gòu)正常；B組椎間盤退變模型組顯示椎間盤結(jié)構(gòu)破壞明顯：椎間盤高度下降，纖維環(huán)排列紊亂，髓核基質(zhì)含量減少；c組注入干細(xì)胞組顯示椎間盤整體結(jié)構(gòu)較B組明顯恢復(fù)：椎間高度較B組好轉(zhuǎn)
7、，纖維環(huán)排列較整齊，髓核基質(zhì)成分增多；D組形態(tài)學(xué)改變與B組相似。3、纖維環(huán)中I型膠原免疫組織化學(xué)分析：A組為正常，顯示纖維環(huán)排列整齊，纖維環(huán)中I型膠原表達(dá)較多。B組纖維環(huán)結(jié)構(gòu)破壞明顯，序列紊亂，I型膠原表達(dá)減少。C組早期纖維環(huán)結(jié)構(gòu)破壞明顯，序列紊亂，I型膠原表達(dá)減少，2周后逐漸好轉(zhuǎn)：纖維環(huán)組織形態(tài)學(xué)排列逐漸整齊，I型膠原表達(dá)逐漸增多，纖維環(huán)結(jié)構(gòu)得到修復(fù)，說明植入干細(xì)胞對(duì)纖維環(huán)具有生物學(xué)修復(fù)作用。D組纖維環(huán)形態(tài)和I型膠原表達(dá)與B組基本一致，說明藻酸鹽只是干細(xì)胞的載體，對(duì)椎間盤無(wú)修復(fù)作用。結(jié)論骨髓基質(zhì)干細(xì)胞因其來(lái)源豐富、取材簡(jiǎn)便、容易分離純化培養(yǎng)、擴(kuò)增
8、迅速、是較理想的組織工程種子細(xì)胞。將大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞移植到退變的椎間盤后可以在一定的時(shí)間內(nèi)延緩或修復(fù)椎間盤退變。關(guān)鍵詞骨
