木霉菌的發(fā)酵工藝及對黃瓜立枯病的生防機理研究

木霉菌的發(fā)酵工藝及對黃瓜立枯病的生防機理研究

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1、河北農業(yè)大學碩士學位論文木霉菌的發(fā)酵工藝及對黃瓜立枯病的生防機理研究姓名:胡丹丹申請學位級別:碩士專業(yè):植物病理學指導教師:董金皋;姜瑞波20050601摘要利用平板對峙法測定了長柄木霉(TrichodermalongbrachitumPdfailACCC30150、檸檬綠木霉(ZcitrinovirideBissett)ACCC30152、綠色木霉(zviridePersoonexFries)A、哈茨木霉(ZharzianumW1fai)B對13種植物病原真菌的抑菌作用。結果表明,這4株木霉菌具有較廣泛的抑菌譜,除對玉

2、米黃斑病菌(Curvularialunata)抑菌率較低以外,對所測定的其余植物病原真菌都有較強的抑制作用。其中,長柄木霉ACCC30150對黃瓜立枯病菌(RhizoctoniasolaniKulhn)的抑菌作用最強,抑菌率達到95%。同時還發(fā)現(xiàn),木霉可以快速競爭營養(yǎng)和空間,使病原菌生長受到抑制出現(xiàn)切線生長現(xiàn)象,且不同木霉菌對不同病原菌表現(xiàn)出不同的抑菌特征。將4株木霉與黃瓜立枯病菌對峙培養(yǎng),在普通光學顯微鏡下可觀察到長柄木霉ACCC30150和檸檬綠木霉ACCC30152菌絲能夠沿著立枯絲核菌的菌絲平行生長,并且產生了附

3、著胞狀分枝,最終使病原菌菌絲斷裂.細胞質外泄、菌絲干癟,但是卻沒有發(fā)現(xiàn)綠色木霉A和哈茨木霉B有類似的重寄生現(xiàn)象。此外,對于菌絲斷裂過程首次提出“機械力拉斷機制”的猜想。對4株木霉發(fā)酵液的性質進行測定,結果表明,4種木霉發(fā)酵終了發(fā)酵液呈中性偏酸性。其pH都為6,0,但ACCC30152發(fā)酵液pH值為正中性,4種發(fā)酵液顏色也不近相同。對菌絲體和發(fā)酵液中活性物質的粗提液進行活性測定,結果發(fā)現(xiàn),只有長柄木霉ACCC30150有抗生活性,其抗生活性物質主要位于發(fā)酵液中,并可以能溶解到乙酸乙酯等有機溶劑中,對黃瓜立枯病菌有明顯的拮抗

4、作用。本試驗選用黃瓜立枯病菌作為所開發(fā)木霉生防菌的供試病原菌,將平板對峙試驗作為初篩結果,對這4株木霉繼續(xù)做溫室防效試驗。在溫室中測定了不同木霉菌株、不同接入成分、不同接入時間的幾種處理下木霉對黃瓜立枯病的防治效果。結果表明,溫室條件下4株木霉對黃瓜立枯病的防治效果有一定的差異,與農藥多菌靈相比較,防治效果也有一定的差異。其中長柄木霉菌ACCC30150能夠有效的防治黃瓜立枯病,哈茨木霉B和檸檬綠木霉ACCC30152效果次之,分別達到了多菌靈防效的77.3%、63.6%和59.1%。同時表明,以帶菌絲的木霉混合發(fā)酵液與

5、病原菌同時接入黃瓜幼苗的防病效果最好。此外,綠色木霉A對黃瓜有明顯的促生長作用。通過對5種處理(T-R-、T+R.、T-R+、T+R+、T++IH)的不同時間段(接種后Oh、12h、24h、48h、60h、72h、84h、96h、108h)取樣測定苯丙氨酸解氨酶(隊L)、過氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(cAT)4種與抗病有關的酶的活性。測定結果表明,這4種酶活性變化趨勢在不同的處理中和不同的組織中呈現(xiàn)一定的規(guī)律性,分析發(fā)現(xiàn),該木霉能誘導黃瓜幼苗的系統(tǒng)抗病性。通過對長柄木霉ACCC30150發(fā)酵

6、條件的研究,初步確定了其菌絲生長的最適碳源是葡萄糖,最適氮源是蛋白胨,最適碳氮比是4:l,最適溫度是28"C,最適pH值是6.0,最適通氧狀況是轉速為250rpm,500mL三角瓶裝液量為150mL;產厚垣孢子的最適碳源是葡萄糖,最適氮源是蛋白胨,最適碳氮比是3:2,最適溫度是28"(2.最適pH值是5.0,最適通氧狀況是轉速為250rpm,500mL三角瓶裝液量為150mL。關鍵詞:木霉;黃瓜立枯?。簧锓乐?;作用機制:發(fā)酵StudyonFermentationandActionMechanismofTrlchoder

7、maAgainstRhizoctoniasolaniSpecialth:PlantpathologyMastercandidate:HuDall-danSupervisor:DongJin-gaoABSTRACTInhibitioneffectsofTrichodermalongbrachitumACCC30l50.7=citrinovirideACCC30152.7=virideAandZharziahUmBweretestedagainstmirteenplantpathogensbydualcultureonpot

8、atodextroseagarPetriplates.Theresultsshowedthatthesefourstrainshadwidcinhibitingspectrumsandstrongerinhibitionabilitiesagainstother12kindsofpathogensexceptforC

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