豬偽狂犬病毒變異株分離鑒定及免疫抗體檢測(cè)

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1、分類號(hào)：Ｓ８５單位代碼：１０１８３研究生學(xué)號(hào)：２０１３８５Ｋ００８密級(jí)：公開(kāi)吉林大學(xué)碩士學(xué)位論文專業(yè)ｒ?qū)W位（）豬偽狂犬病毒變異株分離鑒定及免疫抗體檢測(cè)Ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｏｒｃｉｎｅｓｅｕｄｏｒａｂｅｓｐｐｉｖｉｒｕｓｍｕｔａｎｔａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌａｎｔｉｂｏｄｙ作者姓名：李振偉類別：獸醫(yī)碩士領(lǐng)域（方向）：獸醫(yī)指導(dǎo)教師：丁壯教授培養(yǎng)單位：動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院２０１８年１２月未經(jīng)本論文

2、作者的書面授權(quán)，依法收存和保管本論文書面版本、電子版本的任何單位和個(gè)人，均不得對(duì)本論文的全部或部分內(nèi)容進(jìn)行任何形式的復(fù)制、修改、發(fā)行、出租、改編等有礙作者著作權(quán)的商業(yè)性使用（但純學(xué)術(shù)性使用不在此限）。否則應(yīng)承擔(dān)侵權(quán)的法律責(zé)任。，吉林大學(xué)碩士學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交學(xué)位論文，是本人在指導(dǎo)教師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中己經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本

3、人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：２０１８年１２月６日豬偽狂犬病毒變異株分離鑒定及免疫抗體檢測(cè)Isolationandcharacterizationofaporcinepseudorabiesvirusmutantanddetectionofimmunologicalantibody作者姓名：李振偉領(lǐng)域（方向）：獸醫(yī)指導(dǎo)教師：丁壯教授類別：獸醫(yī)碩士答辯日期：2018年12月6日II摘要本研究從河南某發(fā)病豬場(chǎng)的發(fā)病仔豬腦組織中成功分離到一株偽狂犬病毒，對(duì)該病毒進(jìn)行了鑒定，確定為偽狂犬病毒變

4、異株，命名為HN2012株，并對(duì)其進(jìn)行了gE基因組的擴(kuò)增以及遺傳進(jìn)化分析，同時(shí)對(duì)HN2012株基因缺失疫苗（gE-、gE-/gG-）進(jìn)行了抗體檢測(cè)以及攻毒保護(hù)效果進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。1、偽狂犬病毒變異株的分離鑒定以及遺傳進(jìn)化分析將病料組織上清液接種到BHK-21細(xì)胞上，培養(yǎng)36h后，細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)腫脹、變圓、聚集、出現(xiàn)合胞體等明顯的病變。在經(jīng)過(guò)3次克隆純化的病毒液在BHK-21細(xì)胞上培養(yǎng)可以測(cè)得TCID-7.57/0.1ml。將病毒液接種昆明小鼠、家兔、仔50為10豬等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，均出現(xiàn)典型的偽狂犬癥狀。gE氨基酸序列分析對(duì)比結(jié)果表明，HN

5、2012與其它毒株同源性為94.82%-99.83%。其中與國(guó)內(nèi)分離株同源性為97.07%-99.83%，與國(guó)外分離毒株同源性為94.82%-96.03%，2012年以后分離毒株同源性為99.14%-99.83%。HN2012與其它毒株序列出現(xiàn)1-30不等的變異。以上結(jié)果表明國(guó)內(nèi)分離的PRV毒株已經(jīng)明顯的劃分為兩個(gè)亞群：2012年前分離毒株亞群和2012年后分離毒株亞群。該結(jié)果為今后豬偽狂犬病毒疫苗株的選擇提供了有益的參考。2、疫苗效力的檢驗(yàn)疫苗效力實(shí)驗(yàn)通過(guò)免疫昆明小鼠后攻毒HN2012株來(lái)對(duì)三種疫苗效力進(jìn)行評(píng)價(jià)，根據(jù)獸用生物制品

6、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)匯編（2011）中的豬偽狂犬病油乳劑滅活疫苗的效力檢驗(yàn)要求：對(duì)照組全部死亡，實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立，實(shí)驗(yàn)組二免保護(hù)率應(yīng)至少達(dá)到70%，該疫苗的效力檢驗(yàn)合格。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：這三種疫苗的二免保護(hù)率全部高于70%，所以三種疫苗效力檢驗(yàn)全部合格。根據(jù)《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》（2017年版）中豬偽狂犬病滅活疫苗效力檢驗(yàn)規(guī)定，檢驗(yàn)gE-和gE-/gG-對(duì)靶動(dòng)物的效力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明兩種基因工程疫苗株免疫豬血清中和指數(shù)均大于316，結(jié)果判定合格,因此兩株基因缺失滅活疫苗效力檢驗(yàn)都符合國(guó)家《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。綜上所述，本研究檢驗(yàn)的豬偽狂犬病毒變異株HN

7、2012的兩株基因工程疫苗株都具有良好的免疫保護(hù)效果，為我國(guó)豬偽狂犬I病防控和疫苗株選擇提供積極的數(shù)據(jù)支持。關(guān)鍵詞：偽狂犬病毒；變異；分離鑒定.IIAbstractApseudorabiesvirusstrainwassuccessfullyisolatedfromthebraintissueofpigsinapigfarminHenanProvince.ThestrainnamedHN2012wasidentifiedasamutantstrainbygEgeneamplificationandgeneticevolutiona

8、nalysis.Meanwhile,theprotectiverateofgeneknocking-outvaccines(gE-andgE-/gG-)challengedwithHN2012wasevaluatedbyantibodytestsa