肌肽對人乳腺癌MCF-7細胞增殖、遷移侵襲抑制作用及其機制的研究

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1、中圖分類號：R737.9論文編號：2018327009UDC：密級：公開碩士學(xué)位論文肌肽對人乳腺癌MCF-7細胞增殖、遷移侵襲抑制作用及其機制的研究作者姓名：戴世龍學(xué)科名稱：外科學(xué)研究方向：普通外科學(xué)學(xué)習(xí)單位：華北理工大學(xué)學(xué)習(xí)時間:3年提交日期:2018年4月10日申請學(xué)位類別：臨床醫(yī)學(xué)碩士導(dǎo)師姓名：張青松教授單位：華北理工大學(xué)附屬開灤總醫(yī)院論文評閱人：匿名單位：匿名單位：論文答辯日期：2018年5月24日答辯委員會主席：馬曉龍教授關(guān)鍵詞：肌肽；乳腺癌細胞；PKM；MTA1；PTBP1唐山華北理工大學(xué)2018年6月TheInhibitoryEffec

2、tofCarnosineontheProliferation、MigrationandInvasionofMCF-7HumanBreastCancerCellsDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofClinicalMedicinebyDaiShilong(Surgery)Supervisor:Ph.DZhangQingsongJune,2018獨

3、創(chuàng)性說明本人鄭重聲明：所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，也不包含為獲得華北理工大學(xué)以外其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中做了明確的說明并表示了謝意。論文作者簽名：日期：年月日關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解華北理工大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：已獲學(xué)位的研究生必須按學(xué)校規(guī)定提交學(xué)位論文，學(xué)校有權(quán)保留、送交論文的復(fù)印件，允許論文被查閱和借閱；學(xué)校可以將學(xué)位論文的全部或

4、部分內(nèi)容采用影印、縮印或編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行公開、檢索和交流。作者及導(dǎo)師同意論文公開及網(wǎng)上交流的時間：自授予學(xué)位之日起；□自年月日起。作者簽名：導(dǎo)師簽名：簽字日期：年月日簽字日期：年月日摘要目的通過研究肌肽對人乳腺癌細胞MCF-7的增殖抑制以及遷移和侵襲抑制現(xiàn)象，探討肌肽的可能作用機制。方法通過MTT實驗分別檢測實驗組及對照組細胞的存活率；細胞平板克隆形成實驗分別檢測各分組細胞的克隆形成數(shù)；細胞劃痕愈合實驗、Transwell遷移和侵襲實驗分別檢測各組細胞的遷移和侵襲能力；實時熒光定量PCR法檢測目的基因（PTBP1、PKM1、PKM2和MTA1）mR

5、NA的轉(zhuǎn)錄水平；Westernblot檢測丙酮酸激酶PKM1和PKM2、腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白MTA1的表達水平。應(yīng)用GraphPadPRISM6.0軟件及SPSS23.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果1MTT實驗結(jié)果顯示，不同肌肽濃度（12.5mM、25mM、50mM和100mM）處理24、48和72h后，乳腺癌細胞的存活率隨濃度的增大而降低（F=4.852，P<0.05），具有一定的濃度依賴，但是與時間的關(guān)系并不顯著（F=1.825，P>0.05），并且經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn)時間與肌肽濃度之間并不存在交互效應(yīng)（F=1.829，P>0.05）。2細胞平板克隆形成實驗

6、結(jié)果顯示，人乳腺癌MCF-7細胞經(jīng)肌肽處理后，與對照組相比可以發(fā)現(xiàn)細胞克隆集落數(shù)明顯減少（F=746.5，P<0.05），各組平板克隆集落數(shù)分別為：25mM組克隆集落數(shù)為135.00±6.40，50mM組為62.00±7.97，100mM組為7.4±1.34，對照組為223.60±11.35。3Transwell遷移實驗結(jié)果數(shù)據(jù)顯示，對照組和實驗組（25mM、50mM和100mM）平均穿過小室膜的細胞數(shù)分別為313.00±23.35、220.60±21.54、132.40±7.77和90.80±5.50個，實驗組平均穿膜細胞數(shù)量較對照組平均穿膜細胞數(shù)

7、顯著減少，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F=177.20，P<0.05）。4Transwell侵襲實驗結(jié)果顯示，空白對照組和實驗組（25mM、50mM和100mM）平均穿膜細胞數(shù)分別為258.60±21.93、178.40±11.26、123.40±13.72和63.60±13.50個，經(jīng)統(tǒng)計分析后發(fā)現(xiàn)，各組間的穿膜細胞數(shù)差異明顯（F=140.6，P<0.05）；與對照組相比較，實驗組的穿膜細胞數(shù)均明顯減少，且隨著肌肽濃度增高，穿膜細胞數(shù)隨之下降（P<0.05）。5細胞劃痕愈合實驗結(jié)果顯示，空白對照組、25mM組、50mM組和100mM組細胞愈合率分別為0.4

8、6±0.02、0.36±0.02、0.27±0.05和0.03±0.02，顯著抑制乳腺癌細胞的劃痕愈合率（F