MMP-11在胃癌細(xì)胞增殖和侵襲中的作用及機(jī)制研究

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1、暨南大學(xué)博士學(xué)位論文題目（中英對(duì)照）：MMP-11在胃癌細(xì)胞增殖和侵襲中的作用及機(jī)制研究StudyontheroleofMMP-11intheproliferationandinvasionofgastriccancercellsandthemechanism作者姓名：蘇超指導(dǎo)教師姓名及學(xué)位、職稱：王存川博士教授學(xué)科、專業(yè)名稱：外科學(xué)論文提交日期：2018年5月25日論文答辯日期：2018年6月4日答辯委員會(huì)主席：陳積圣教授論文評(píng)閱人：學(xué)位授予單位和日期：1MMP-11在胃癌細(xì)胞增殖和侵襲中的作用及機(jī)制研究22[MMP-11在胃癌細(xì)胞增殖和侵襲中的作用及機(jī)制研究]MMP-11在胃癌

2、細(xì)胞增殖和侵襲中的作用及機(jī)制研究中文摘要胃癌（GC，gastriccarcinoma）是一種常見(jiàn)的惡性腫瘤，其發(fā)病率在世界各類癌癥中排第四位，死亡率排第二位，許多GC患者就醫(yī)時(shí)已是癌癥的進(jìn)展晚期，臨床醫(yī)治的療效和預(yù)后差，嚴(yán)重危及和降低了國(guó)民的生活品質(zhì)，是亟待解決的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題。GC發(fā)展的生物學(xué)過(guò)程非常復(fù)雜，由多種因素、基因和不同步驟共同作用導(dǎo)致，而對(duì)其發(fā)病的確切分子機(jī)制現(xiàn)有文獻(xiàn)尚未報(bào)道。因此，研究GC細(xì)胞增殖和侵襲的分子生物學(xué)機(jī)制，并找出與之有關(guān)的生物學(xué)標(biāo)志物，是GC臨床醫(yī)學(xué)研究的主要方向。基質(zhì)金屬蛋白酶家族(MMPs)與許多癌瘤的產(chǎn)生、進(jìn)展和預(yù)后關(guān)系密切。MMPs在細(xì)胞外基質(zhì)

3、(ECM)的降解、腫瘤細(xì)胞的粘附和運(yùn)動(dòng)中發(fā)揮重要作用，與腫瘤的產(chǎn)生、侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)。MMP-11屬于MMP家族中的間質(zhì)溶素，關(guān)于其對(duì)腫瘤作用機(jī)理的報(bào)道有限，其可能是通過(guò)胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（IGF-1）途徑對(duì)癌瘤的產(chǎn)生、進(jìn)展過(guò)程，包含抗細(xì)胞凋亡，細(xì)胞增生，細(xì)胞粘連吸附，血管形成等進(jìn)行介入和影響。IGF家族在惡性腫瘤的產(chǎn)生和進(jìn)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用，其中IGF-1是一種具有高強(qiáng)度的有絲分裂原，通過(guò)IGF-1受體（IGF-1R）發(fā)揮其在機(jī)體內(nèi)的生物學(xué)作用。IGF-1單鏈分子量為7649kDa，由70個(gè)氨基酸組成，它在細(xì)胞生長(zhǎng)和代謝的調(diào)控方面作用重大。為了探索MMP-11在GC發(fā)病過(guò)程里的作用

4、及機(jī)制，本研究以臨床GC樣本及GC細(xì)胞系SGC-7901為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過(guò)基因轉(zhuǎn)染，運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法、流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)、實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR、蛋白印跡（WB）等手段系統(tǒng)研究MMP-11和IGF-1在不同分期和分型GC細(xì)胞中的表達(dá)，及通過(guò)不同的干預(yù)方法測(cè)定MMP-11和IGF-1對(duì)GC細(xì)胞增殖和侵襲的影響，并探索MMP-11是否通過(guò)影響IGF-1的表達(dá)來(lái)促進(jìn)GC細(xì)胞生長(zhǎng)。3MMP-11在胃癌細(xì)胞增殖和侵襲中的作用及機(jī)制研究第一部分MMP-11和IGF-1在胃癌組織中的表達(dá)目的：本部分實(shí)驗(yàn)旨在探討不同分型和分期GC組織中MMP-11和IGF-1的表達(dá)情況。方法：選取202例確診并

5、接受手術(shù)治療的GC患者，選取與腫瘤邊界間距大于5cm的癌旁非腫瘤胃粘膜組織，作為正常對(duì)照組；GC組織樣本取材于癌性潰瘍凹陷內(nèi)側(cè)壁。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)IGF-1和MMP-11在腸型和彌漫型以及不同分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期GC組織和相應(yīng)的癌旁組織的相對(duì)表達(dá)狀況；應(yīng)用蛋白印跡法測(cè)定IGF-1和MMP-11在腸型和彌漫型以及不同分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期GC組織和相應(yīng)的癌旁組織的蛋白表達(dá)。結(jié)果：經(jīng)RT-PCR和蛋白印跡測(cè)定，與正常對(duì)照組的癌旁組織相比較，MMP-11在腸型和彌漫型GC組織中表達(dá)明顯上升，且MMP-11在彌漫型GC組織中的表達(dá)顯著大于腸型；MMP-11水平隨著

6、GC臨床分期的遞增而增加，在Ⅲ期GC組織中的表達(dá)顯著高于Ⅰ期，在Ⅳ期GC組織中的表達(dá)顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期。經(jīng)RT-PCR和蛋白印跡測(cè)定，與正常對(duì)照組的癌旁組織相比，IGF-1在腸型和彌漫型GC組織中表達(dá)明顯上升，且IGF-1在彌漫型GC組織中的表達(dá)顯著大于腸型；IGF-1水平隨著GC臨床分期的遞增而增加，在Ⅲ期GC組織中的表達(dá)顯著大于Ⅰ期，在Ⅳ期GC組織中的表達(dá)顯著大于Ⅰ期和Ⅱ期。結(jié)論：GC發(fā)生能引起MMP-11和IGF-1表達(dá)水平升高，MMP-11和IGF-1的表達(dá)與GC細(xì)胞的分型和分期相關(guān)，表明MMP-11和IGF-1可能對(duì)GC的發(fā)生、發(fā)展及分化有不可忽視的影響。第二部分MMP-

7、11干預(yù)對(duì)IGF-1在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)及作用機(jī)制目的：本部分實(shí)驗(yàn)的目的是為了探討MMP-11干預(yù)對(duì)IGF-1表達(dá)水平的影響及作用機(jī)制。方法：購(gòu)買人GC細(xì)胞SGC-7901，將其隨機(jī)分為5組：rh-MMP-11干預(yù)（SGC-7901培養(yǎng)基中加入25、50、100ng/mlrh-MMP-11）、NT157干預(yù)（SGC-7901培養(yǎng)基4[MMP-11在胃癌細(xì)胞增殖和侵襲中的作用及機(jī)制研究]中加入50ng/ml的rh-MMP-1124h后，再加入5、10μMNT157）、白皮