大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞的體外誘導(dǎo)分化研究

大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞的體外誘導(dǎo)分化研究

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1、第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞的體外誘導(dǎo)分化研究姓名:高峰申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):外科學(xué)(心血管外科學(xué))指導(dǎo)教師:蔡振杰2003.5.1獨創(chuàng)。狴聲明萊承學(xué)校嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶W(xué)風(fēng)與伉良的科學(xué)道德,本人聲明所呈交的論文是我個人在導(dǎo)褥搓等下遺褥翦蘸究王攆瑗囂耩蘸霸究驥萊。鬈冀戇麓,豫了交率禱鬻絮以標(biāo)注和致謝的地雋外,論文中不包含其地八已經(jīng)發(fā)表藏撰寫過魈砩究成果,不包禽本人藏他^己申請學(xué)位或其他弼途使用過酌成果。與我一同I作的同志辯奉贛究礁搬蕤{薹舞貢獻(xiàn)瘸琶豢論文攀l睪了麓臻蘸譜弱舞表示了致謝。申請學(xué)鍵論文與資料囂育不賓之處,本人承擔(dān)一切梗關(guān)責(zé)任。褥交

2、捧砉菱蓍:強囂耀保護(hù)知識產(chǎn)權(quán)聲明a_咚,≤、每l本人完全了解第四軍醫(yī)大學(xué)育關(guān)保護(hù)知識產(chǎn)權(quán)鷯規(guī)定,娜:講究。生在枝攻談學(xué)譴期溺論文I釋蔚稚談產(chǎn)較犟位麓第西軍醫(yī)大學(xué)。本^謙證華鼗離較茜,發(fā)表論文蓑愛懲論文I佟鹱累囂警簽?zāi)±`爨然淹纂毽攀囂大學(xué)。學(xué)較鴦較璨瓣送交論文的復(fù)印件,允許論文被查閽和措聞;學(xué)較可以公布論文韻全罐或部分譚容(探密內(nèi)容豫羚),可議累焉辯球、縮耀或懿糟復(fù)制手段謙存論文。論交撂妻簽器:~囊逸霹舞簽羲囂弱:避璺}第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文英文縮寫MSCsrMSCsESHSCsCFU,F(xiàn)5.AzaDMEMFBSPBScTnIcTnTPAGESDS1HsRPA

3、P縮略詞表英文全名mesenchymalstemcellsratmesenchymalstemcellsembryonicstemcellshematopoieticstemcellscolonyformingunitsfibroblastic5-azacytidineDulbeccoEagle’sminimumessentialmediumfetalbeefSel'UlTlphosphatebufferedsalinecardiactroponinIcardiactroponinTpolyacrylamidegelelectrophresissodiumdo

4、decylsulfateN—trisaminomethanerestpotentialactionpotential中文全名骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞/間充質(zhì)干細(xì)胞大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞胚胎干細(xì)胞造血千細(xì)胞成纖維細(xì)胞樣集落形成單位5一氮胞苷改良Eagles培養(yǎng)液胎牛血清磷酸鹽緩沖液心肌肌鈣蛋白I心肌肌鈣蛋白T聚丙烯酰胺凝膠電泳十二烷基硫酸鈉N一三氨基甲烷靜息電位動作電位第四軍匿太學(xué)碩懶學(xué)位論文中文摘要大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞的體外誘導(dǎo)分化研究研兜生毫峰導(dǎo)師蘗振杰教授e成體心肌細(xì)胞的再生懸醫(yī)學(xué)界急待解決的難題之一,而臨床上心臟痣癃入足乎都轉(zhuǎn)套不強程度豹心瓢纓黲的攢害

5、,冀憩導(dǎo)致心麓秘熊麴進(jìn)一步惡化。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcells,MSCs)所具有的多熊分訖黲鏈為心虢緩熬囂楚鶼醞究提供了凝熬方爨魏愚躐。4本研究擬通過體外分離、培養(yǎng)大鼠骨髓間充威干細(xì)胞(ratmesenchy.malstemcells,rMSCs),麓寨其娥魏學(xué)掩經(jīng);霹培養(yǎng)懿rMSCs紛體補藥物誘導(dǎo),促其向心肌樣細(xì)胞分化并予以臻定,探討體外藥物誘導(dǎo)分化茲條{孛、瓣籜秘特點。方法:percoll液密度梯度分離rMSCs體外培養(yǎng),觀察其生物學(xué)特性:震不嗣濃霞5一氮慈棼(5.a(chǎn)zacytidine,5-Aza)瓣其送行誘導(dǎo)24h緩囂繼續(xù)培

6、養(yǎng)4w,利用免疫細(xì)胞化學(xué)、透射電鏡、westernblot等技術(shù)對誘導(dǎo)后rMSCs懿心霆蓬緩藏櫸分詫遴行鏊定,并嘗試運蕉溪冀鐠技術(shù)濺定蘩靜急電位(restpotential,RP)和動作電位(actionpotential,AP),對其電生理俸&竊步探討。(結(jié)果:percoll液密度梯發(fā)分離的rMSCs純度較高,在體外培養(yǎng)時細(xì)藤麓一佳較鱘;5一lOpmol/L5-Aza為誘導(dǎo)rMSCs游心膩祥縮臃分億較為合適的濃度;免疫細(xì)胞化學(xué)染色可見a,actin,cardiactroponinI(eTnI)陽瞧維臆,透射電鏡觀察到部分纓脆形成瓤絲樣繚梅,緇胞中可藏弱豐富的

7、線粒體和糖原顆粒;westernblot顯示心肌特算性結(jié)構(gòu)蛋白cTnI在2第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文誘導(dǎo)后的rMSCs中有表達(dá)。部分細(xì)胞有著與大鼠心室肌細(xì)胞接近的RP,但未能誘發(fā)出AP。又結(jié)論:l、percoll液密度梯度離心法是一種簡便、有效分離MSCs的方法;2、5.10umol/L5-Aza為誘導(dǎo)rMSCs向心肌樣細(xì)胞分化較為合適的濃度;3、MSCs具有多能分化特性,體外培養(yǎng)的rMSCs可在5-Aza誘導(dǎo)下向具有心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)特點的心肌樣細(xì)胞分化。關(guān)鍵詞:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞;5一氮胞苷;免疫印跡:膜片鉗;心?。?xì)胞散細(xì)胞分化f藥物作用電生理“第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)

8、位馀文ABSTRACTratmesea

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