《自身抗體的檢測(cè)》PPT課件

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1、自身抗體的檢測(cè)及應(yīng)用鄂爾多斯市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科曹青鳳2012.9.19抗核抗體（ANA）的檢測(cè)與臨床應(yīng)用抗核抗體的定義傳統(tǒng)定義：針對(duì)細(xì)胞核成分抗原總稱。廣義定義：針對(duì)細(xì)胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱。對(duì)ANA的理解不再局限于核成份，而是指核質(zhì)和核蛋白的總稱。ANA測(cè)定原理和方法：間接免疫熒光法（IIF):現(xiàn)多以Hep-2細(xì)胞（人喉癌上皮細(xì)胞）為底物（Ag)，其以核質(zhì)豐富而極大地提高了ANA檢測(cè)的陽(yáng)性率和滴度。是系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的標(biāo)準(zhǔn)篩選試驗(yàn)。我們實(shí)驗(yàn)室采用歐蒙熒光檢測(cè)系統(tǒng)，將1:100作為血清起始稀釋度，所以如果是低滴度

2、的1:100陽(yáng)性，只能視為一個(gè)臨界可疑值，臨床意義不大。ANA作為自身免疫性結(jié)締組織病的篩選試驗(yàn)必須強(qiáng)調(diào)高滴度。ANA的靶抗原分布整個(gè)細(xì)胞，包括細(xì)胞核、細(xì)胞漿、細(xì)胞骨架、細(xì)胞分裂周期蛋白等。ANA檢測(cè)的臨床意義ANA可見于多種自身免疫性疾病，特別是結(jié)締組織疾病，常作為結(jié)締組織疾病的診斷，病情判斷和療效觀察的指標(biāo)已證實(shí)ANA對(duì)很多自身免疫性疾病有診斷價(jià)值。ANA的靶抗原為細(xì)胞核內(nèi)的不同生化成份，包括核酸、細(xì)胞核蛋白和核糖體蛋白。在不同疾病中，特別是風(fēng)濕性疾病，其抗體譜有一定的特意性。在炎癥性風(fēng)濕病中ANA陽(yáng)性率在20%-100%之

3、間，其中類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中ANA陽(yáng)性率最低，為20%-40%。所以，檢測(cè)ANA對(duì)于不同類型風(fēng)濕病意義重大。⑴SLE活動(dòng)性：占95%-100%，非活動(dòng)性：占80%-100%。（2）藥物誘導(dǎo)的SLE：占100%。（3）混合性結(jié)締組織疾?。赫?00%。（4）其它風(fēng)濕性疾?。赫?0%-50%（5）進(jìn)行性系統(tǒng)硬化癥：占85%-95%。（6）多肌炎和皮肌炎：占30%-50%。（7）干燥綜合征：占70%-80%。（8）慢性活動(dòng)性肝炎：占30%-40%。（9）潰瘍性結(jié)腸炎：占26%。常見疾病其它還可見于：非結(jié)締組織疾病中也可出現(xiàn)陽(yáng)性；正常人（特別

4、是老年人）也可出現(xiàn)陽(yáng)性，但滴度低，并且常表現(xiàn)為IgM型；高滴度ANA則高度提示自身免疫性疾病。ANA（＋）的原因風(fēng)濕性疾病SLE多發(fā)性肌炎干燥綜合征硬皮病血管炎R(shí)A正常的健康人女性＞男性，出現(xiàn)率隨年齡而增加風(fēng)濕性疾病患者親屬？孕婦藥物誘導(dǎo)慢性肝臟疾病慢性肺部疾病慢性感染血液系統(tǒng)異常惡性腫瘤SLE患者使用IIF法測(cè)定ANA陰性的一些解釋技術(shù)方面臨床方面經(jīng)皮質(zhì)激素或免疫抑制劑治療。終末期腎病。隱蔽ANA：與循環(huán)中免疫復(fù)合物結(jié)合，沉積于組織。由于大量蛋白尿而從腎臟丟失。ANA的熒光染色型別細(xì)胞核：核均質(zhì)型（DNA、組蛋白和核小體等）核

5、顆粒型（Sm、uRNP、SS-A、SS-B、Ku、I和Ⅱ型周期蛋白）核膜型（板層素、gp120等）核仁型（SCL-70、PM-SCL、RNA多聚酶、原纖維蛋白等）核漿點(diǎn)型（著絲點(diǎn)、核多點(diǎn)及核少點(diǎn)型）細(xì)胞漿：胞漿顆粒型（線粒體、Jo-1、核糖體等）胞漿纖維型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌動(dòng)蛋白等分裂期細(xì)胞陽(yáng)性：紡垂體、中間體、中心體等根據(jù)產(chǎn)生的熒光模型、靶抗原的分布部位分類如下：ANA篩查的方法間接免疫熒光法（IIF）基質(zhì)組合為：HEP-2細(xì)胞+靈長(zhǎng)類肝（猴）核顆粒型：核粗顆粒型抗核抗體染色類型核仁型（nucleolar）均質(zhì)性（ho

6、mogeneous）ANA的熒光類型ANA試驗(yàn)的結(jié)果中一般會(huì)報(bào)告其分型，這些分型可能與某一特定的抗原反應(yīng)活性相關(guān)。分型相關(guān)疾病核仁型硬皮病著絲點(diǎn)型CREST綜合征周邊型SLE斑點(diǎn)型/彌散型混合性結(jié)締組織?。∕CTD）抗雙鏈DNA抗體（ds-DNA）的檢測(cè)與臨床應(yīng)用檢測(cè)：測(cè)定抗ds-DNA以血鞭毛蟲屬的綠螢短膜蟲為靶抗原基質(zhì)，可聯(lián)合使用HEp-2細(xì)胞及靈長(zhǎng)類肝組織檢測(cè)。自身抗原：位于DNA脫氧核糖磷酸框架上?？筪sDNA抗體熒光模式：綠蠅短膜蟲：動(dòng)基體均質(zhì)的或邊緣亮度增強(qiáng)的熒光。Hep-2細(xì)胞：細(xì)胞核的均質(zhì)型熒光。臨床應(yīng)用抗雙鏈D

7、NA抗體（ds-DNA）是系統(tǒng)性紅斑狼瘡的特異性抗體，其陽(yáng)性率因檢測(cè)方法而異，在40-90%。但抗ds-DNA陰性并不能排除患有SLE的可能性?？筪s-DNA抗體具有預(yù)測(cè)價(jià)值，85%的出現(xiàn)抗ds-DNA抗體的健康人在五年內(nèi)發(fā)展為SLE。已證實(shí)抗ds-DNA抗體參與SLE的病理過程，在疾病形成過程中，抗ds-DNA和其抗體形成的免疫復(fù)合物沉積在皮下毛細(xì)血管、腎和其他器官內(nèi)，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，從而導(dǎo)致組織損傷?？贵w水平與疾病活動(dòng)度相關(guān)，隨著疾病活動(dòng)的控制，抗ds-DNA抗體滴度可以下降或消失。ANA譜3檢測(cè)及臨床應(yīng)用抗RNP/Sm抗體熒

8、光模式：Hep-2片：細(xì)胞核粗顆粒，核仁陰性。肝組織切片：同上。熒光法不能區(qū)分抗RNP和抗體Sm?？筊NP/Sm抗體自身抗原：抗原RNP和Sm屬于一組小核糖核蛋白（snRNP），由低分子量的RNA和多種蛋白質(zhì)組成，RNA中尿苷（U-RNA）含量較高。臨床意義：高