山羊同期發(fā)情、超數(shù)排卵及胚胎移植研究

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1、西南師范大學(xué)碩士學(xué)位論文山羊同期發(fā)情、超數(shù)排卵及胚胎移植研究姓名：陳兵申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：動(dòng)物學(xué)指導(dǎo)教師：魏泓2003.6.1山羊同期發(fā)情、超數(shù)排卵及胚胎移植研究學(xué)科專業(yè)：動(dòng)物學(xué)內(nèi)容摘要研究方向：動(dòng)物胚胎工程指導(dǎo)教師：魏泓教授研究生：陳兵(2000263)目的：利用外源激素控制卵泡波和黃體原理，優(yōu)化山羊同期發(fā)情技術(shù)、超數(shù)排卵技術(shù)和胚胎移植技術(shù)流程，評(píng)價(jià)各種處理方法對(duì)山羊生殖調(diào)控的結(jié)果。，方法：試驗(yàn)一(改進(jìn)同期發(fā)情研究)：選擇20只健康經(jīng)產(chǎn)試驗(yàn)羊，兩次o．05mgPG處理澗隔11d)，使發(fā)’隋階段同期化．然后用諾孕酮陰道海綿栓處理，放栓同時(shí)肌注10mg黃體酮和2mg苯甲酸

2、雌二醇。試驗(yàn)分兩組：短期處理組(5d，n=10)和長(zhǎng)期組(13d，n=10)，撤栓時(shí)注射0．05mgPG。處理末引進(jìn)公羊試情，撤栓時(shí)計(jì)為0h，觀察記錄發(fā)情情況，發(fā)情結(jié)束后剖檢卵巢卵泡與黃體發(fā)育情況。試驗(yàn)二(改進(jìn)超排方法研究)：16只健康經(jīng)產(chǎn)母羊隨機(jī)分成4組：A組(n：4)，諾孕酮栓處理13d(撤栓時(shí)注射O．05mgPG)，第11d開始超排，325IUFSH溶于生理鹽水按遞減法，分8次肌注．次間間隔12h。；B組(n=4)，諾孕酮栓處理13d，第l1d開始超排，325IUFSH溶解于30％PVP、一次肌注；C組(n=4)，諾孕酮栓處理7d(撤栓時(shí)注射0．05mgPG)，第5d

3、開始超排，325IUFSH溶于生理鹽水按遞減法，分8次肌注，次間間隔12h；D組(n=4)．諾孕酮栓處理7d，第5d開始超排，325IUFSH溶解于30％PVP～次肌注。于撤栓(或注射PG)后引入公羊早中晚各進(jìn)行一次發(fā)情鑒定，發(fā)情開始后立即進(jìn)行配種，并肌注LHRH．A315ug，6～8小時(shí)后再配一次，記錄終止發(fā)情時(shí)間和配種時(shí)間。在配種后第5,--6d手術(shù)法沖胚，并計(jì)數(shù)卵巢黃體和卵泡數(shù)、回收胚胎數(shù)以及可移植用胚胎數(shù)。試驗(yàn)三(胚胎移植程序化研究)：5只健康經(jīng)產(chǎn)山羊，經(jīng)諾孕酮短期法結(jié)合FSH的超排處理，分別從輸卵管(n=2)和子宮角(n=3)手術(shù)回收兩個(gè)時(shí)期的胚胎，然后移植給短期

4、法同期發(fā)情的受體羊(輸卵管移植n=6．子宮角移植n=12)，觀察是否返情、妊娠情況。具體程序?yàn)椋旱?d開始放諾孕酮栓及注射孕酮和雌二醇，第5d用325IUFSH溶于30％PVP一次肌注超排．第7d撤栓．在第9～10d不經(jīng)過(guò)發(fā)情鑒定而視之為發(fā)情期，第10~1ld配種授精，第13～14d輸卵管沖胚或第16--17d子宮角供體沖胚或受體移植。結(jié)果：同期發(fā)情試驗(yàn)結(jié)果，處理山羊全部表現(xiàn)發(fā)情(發(fā)情率100％)，短期組山羊發(fā)情時(shí)間(36．-．,60h)比長(zhǎng)期組山羊發(fā)情時(shí)間(40--72h)分布更集中。單因素方差檢驗(yàn)證明，兩種處理從撤栓到開始發(fā)情時(shí)間間隔有顯著差異(56．80±9．58hV

5、S45．60±6．85h，P<0．叭)，發(fā)情持續(xù)時(shí)間之間沒(méi)有顯著差異(33．90+5．67hVS32．70±1．43h，P>0．05)。發(fā)情結(jié)束后，從腹腔引出卵巢觀察卵泡與新生黃體情況，短期組山羊卵巢表面沒(méi)有大卵泡存在，而有1~2個(gè)排卵點(diǎn)或新生黃體；長(zhǎng)期組在撤栓后60h以內(nèi)發(fā)’隋的山羊(6／10)有1—2個(gè)排卵點(diǎn)和新生黃體，而60h虬外的羊(4／10)卵巢存在大卵泡且部分黃體化、無(wú)排卵點(diǎn)。說(shuō)明激素處理卵巢反應(yīng)效果短期法優(yōu)于長(zhǎng)期法。超數(shù)排卵試驗(yàn)結(jié)果，A、B組之間的超排卵巢反應(yīng)、獲胚總數(shù)與可移胚數(shù)無(wú)顯著差異(26vs26，5±2．94vs3．5±3．11，3±3．56vs2．7

6、5±3，40．P>O．10)，C、D組的超排卵巢反應(yīng)、獲胚總數(shù)與可移胚數(shù)無(wú)顯著差異(47vs47，9．75±O．96vsl0±1．83，7．75±0．50vs9±1．41，P>0．10)：A組與C組的超排反應(yīng)、胚胎回收數(shù)與可移胚數(shù)差異極顯著(26vs47，5±2．94vs9．75±0．96，3±3．56vs7．75±0．50．P<0．01)，B、D組之間超排反應(yīng)、胚胎回收數(shù)與可移胚數(shù)差異極顯著(26vs47，3．5±3．1lvsl0±1．83，2．75±3．40vs94-1．41，P<0．01)。試驗(yàn)結(jié)果表明FSH一次(溶于30％PVP)和多次注射(溶于生理鹽水)能取得同樣

7、有效的超排效果與可移胚數(shù)：超排前利用諾孕酮栓處理5d(短期法)比處理13d(長(zhǎng)期法)更能提高卵巢反應(yīng)(黃體數(shù)與卵泡數(shù))和可移植用胚胎數(shù)。第三個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明能夠按預(yù)計(jì)的時(shí)間進(jìn)程不經(jīng)過(guò)發(fā)情鑒定而實(shí)現(xiàn)定時(shí)(程序化)胚胎移植，11枚早期胚胎輸卵管法移植6只受體，3只妊娠(其中1只產(chǎn)雙羔，一只妊娠晚期死亡，有3個(gè)發(fā)育良好的胎兒)。20枚桑椹胚子宮角法移植12只嬖體，結(jié)果5只妊娠(其中3只受體產(chǎn)羔，其中一只羊產(chǎn)三胞胎，另兩只為雙胞胎)。，結(jié)論：孕激素短期(5天)處理能夠提高同期發(fā)情率和超數(shù)排卵反應(yīng)效果；應(yīng)用FSH溶解于30％的