顯微攝影與暗室技術(shù)

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1、顯微攝影與顯微照片制作中北大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院顯微攝影與暗室技術(shù)顯微攝影(Microphotography)是利用顯微攝影裝置來拍攝顯微鏡視野中所觀察到的物像。顯微攝影技術(shù)是一項重要的技術(shù)，是再現(xiàn)顯微視野中物象的最好方法，具有真實性和科學(xué)性。暗室技術(shù)是在暗室中進行的?，主要指膠片的沖洗，印相和放大技術(shù)。顯微攝影技術(shù)1．工作前的準(zhǔn)備(1)光路系統(tǒng)的清潔顯微攝影必須保證光路系統(tǒng)的清潔，任何光學(xué)部件有了污垢及灰塵，均會影響照片的質(zhì)量。各部件在擦拭時，只能清理表面，而不應(yīng)任意拆卸。(2)光軸中心的調(diào)整顯微攝影時光軸中心的調(diào)整是絕對不可忽視的，否則拍出的圖象，各部分的感光不勻。(3)其它準(zhǔn)備工

2、作用觀察目鏡觀察，先調(diào)好兩眼的瞳距，使兩個視場的象合二為一，再調(diào)節(jié)好兩眼的屈光度以適應(yīng)觀察者的視力。顯微攝影技術(shù)2．視場光闌與孔徑光闌的應(yīng)用在觀察時根據(jù)物鏡的倍率不同視場光闌開大或縮小而給予相應(yīng)的光束面積，以達(dá)到鏡檢的優(yōu)良效果。在顯微攝影時它起著增加和減弱影象反差的作用。當(dāng)視場光闌開大到一定程度時，照射到被攝物體上的光，即會產(chǎn)生反射與不規(guī)則的散射，造成影象反差的損失；當(dāng)視場光闌收縮到取景框邊緣的外方時，圖象的反差就得到改善；視場光闌過度的收縮接近取景框，則圖象的四角部分將被切去。因此，在顯微攝影時，視場光闌的應(yīng)用是重要的一個因素，應(yīng)開啟到比取景框稍大的位置。顯微攝影技術(shù)3．屈光度調(diào)節(jié)與

3、調(diào)焦利用取景側(cè)目鏡（聚焦望遠(yuǎn)鏡）或取景目鏡，首先進行屈光度的校正，旋轉(zhuǎn)取景側(cè)目鏡或取景目鏡上的視度圈，使取景框中的雙十字線達(dá)到最清晰的程度。調(diào)節(jié)此圈可改變透鏡間距，從而改變其焦距，可以補償不同人眼視力的差別。每個人在使用前都需調(diào)節(jié)，應(yīng)用同一只眼睛調(diào)節(jié)，不然兩眼之間也會存在屈光度的差異。屈光度調(diào)節(jié)完成后即可進行調(diào)焦，調(diào)焦時用取景目鏡觀察，將所要拍攝的部分移到取景框中，然后按顯微鏡的使用方法將顯微鏡調(diào)到最佳工作狀態(tài)，使視野圖像清晰，便可進行曝光。顯微攝影技術(shù)4．光的補償拍攝顯微照片時，根據(jù)被攝物體組織結(jié)構(gòu)所占幀幅面積的百分比需要調(diào)節(jié)曝光補償。在明場情況下，如果組織結(jié)構(gòu)的各部分在幀幅內(nèi)均勻分

4、布，這樣不論是平均測光還是點測光，都不需要曝光補償；若被攝物體所占的面積小或分散，則需要進行曝光補償，加長一些曝光時間，否則被攝物體的曝光不夠。反之，在暗場情況下，物象是明亮的，在曝光的補償上就需要減少一些曝光時間。顯微攝影操作步驟1.拍攝前準(zhǔn)備（1）光路合軸?使光軸與光束處于同一軸線上。（2）柯勒氏照明?使觀察的視野獲得均勻而又充分的照明；防止雜散光對照相系統(tǒng)產(chǎn)生影響；使被攝物體不受熱，影象清晰。（3）物鏡與目鏡合理組合?依標(biāo)本的不同和顯微攝影要求，物鏡與目鏡的組合有一定規(guī)范。（4）調(diào)整視場光闌和孔徑光闌使兩者與所用物鏡的數(shù)值孔徑相等，所得的分辨力最高；視場光闌一旦調(diào)好，不要再動，而

5、孔徑光闌可隨物鏡數(shù)值孔徑的更換，做相應(yīng)的調(diào)整。顯微攝影操作步驟2.拍攝程序（1）開啟相機后蓋，安裝膠卷于照相機內(nèi)。（2）打開顯微鏡照明裝置的電源開關(guān)，將亮度調(diào)至適當(dāng)。（3）依個人的視力，調(diào)整攝影目鏡視度圈至雙“十”字線清晰。（4）放一片需要拍攝的標(biāo)本載玻片于載物臺上。在低倍鏡下選好要拍攝的核型或細(xì)胞結(jié)構(gòu)，再轉(zhuǎn)換到高倍鏡下，聚焦標(biāo)本細(xì)節(jié)，準(zhǔn)備拍照。（5）按下曝光按鈕，曝光按鈕亮表示曝光開始進行，熄滅表示曝光完畢。（6）拍攝記錄。暗室技術(shù)感光膠片在拍攝完畢后，需盡快在暗室中沖洗和曬印，其基本原理是顯影液使膠片已感光的銀鹽潛影還原為可見的金屬銀影像；定影液把未被還原的鹵化銀溶去，晾干是便于膠

6、片和相紙保存。暗室技術(shù)操作步驟1.膠片的沖洗(1)在全暗室中把膠片纏入顯影罐，先用清水沖洗1～2分鐘，排除氣泡，然后再把水倒掉。(2)從頂部罐口注入預(yù)先配好的約250mlD-72顯影液。20℃顯影4～6分鐘。顯影中輕輕搖動顯影罐，使膠片表面充分受顯影液作用，顯影完畢，迅速倒出顯影液。(3)水洗1分鐘左右，加入250ml的F-5定影液，20℃定影15分鐘。取出膠片流水沖洗15分鐘以上。(4)將膠片掛起，用脫脂棉輕輕吸掉膠片表面過多的積水，晾干。暗室技術(shù)操作步驟2.底片的擴印(1)膠片晾干后，用放大機的膠片夾子夾住膠片，藥膜面朝下，聚焦取景，然后在紅燈條件下，用壓紙板壓住所需號放大像紙，藥

7、膜面向上，進行曝光。(2)曝光后的像紙，浸入D-72顯影液中，然后不時用竹鑷子夾住像紙翻動，直到顯影適度為止。(3)用水漂洗10～20秒，再浸入F-5定影液中處理15分鐘，取出在流水中沖洗60分鐘左右。(4)放在電熱上光機上烘干；裁邊，裝入有說明的紙袋內(nèi)保存。