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1、華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文激活的星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌的TNF-α在癲癇發(fā)病中的作用姓名：彭俊忠申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：人體解剖學(xué)指導(dǎo)教師：朱家祥2003.4.1華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文激活的景形膠質(zhì)細(xì)胞分泌的TNF．ft．在囊瘸發(fā)病中的作用碩士研究生彭俊忠導(dǎo)師：朱家祥教授華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院解剖學(xué)系武漢430030中文擅要／癲癇是一種嚴(yán)重危害人體健康的常見(jiàn)病和多發(fā)病。在其發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，除了神經(jīng)元的明顯病理改變外，還伴隨著顯著的星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)和功能的異常。我們研究室以往的研究證明，TNF．n不僅可以明顯激活培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞，還可以促進(jìn)其釋放TNF．a(chǎn)、NO、G
2、lu等神經(jīng)活性物質(zhì)，我們推測(cè)激活的星形膠質(zhì)細(xì)胞可能通過(guò)其釋放的神經(jīng)活性物質(zhì)改變了神經(jīng)元的興奮性，從而引起癲癇的發(fā)作。為了、證實(shí)這一設(shè)想，／我們應(yīng)用兩種不同條件刺激下的星形膠質(zhì)細(xì)胞條件培，養(yǎng)液注入大鼠側(cè)腦室，觀察它對(duì)動(dòng)物行為及腦電圖的影響，并運(yùn)用免疫細(xì)胞化學(xué)方法觀察生長(zhǎng)抑素(somatostatin，SS)、Y氨基丁酸(gamma．a(chǎn)minobutyricacid，GABA)及離子型谷氨酸受體NMDARl(N．methyl．D．a(chǎn)spartatereceptor)的表達(dá)情況，以期為激活的星形膠質(zhì)細(xì)胞在癲癇發(fā)病中的作用提供一些在體實(shí)驗(yàn)依據(jù)。，l首先，我們選用腫瘤壞死因子TN
3、F-a(tBmornecrosisfactor．a(chǎn)。TNF．a(chǎn))刺激純化培養(yǎng)的海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞，將此條件培養(yǎng)液(As仃ocyticConditionedMedium，ACM)lOpl注入正常大鼠側(cè)腦室，觀察動(dòng)物行為與腦電圖的變化；同時(shí)，用免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)大腦皮質(zhì)與海馬中SS、GABA與NMDARl表達(dá)水平的改變。結(jié)果：①側(cè)華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文腦室注射ACM可引起大鼠nl級(jí)癲癇樣發(fā)作及典型的尖波、棘波、棘·慢波癲癇樣腦電圖表現(xiàn)；②免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果表明：注射ACM后1h可觀察到大鼠大腦前梨狀皮質(zhì)和海馬ss及NMDARl免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)和平均光密度值
4、均高于對(duì)照組，2．4h達(dá)最高，至8h恢復(fù)至對(duì)照組水平；注射ACM后lh可觀察到大鼠大腦前梨狀皮質(zhì)和海馬齒狀回GABA免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)和平均光密度值均低于對(duì)照組，2．4h達(dá)最低。至8h恢復(fù)至對(duì)照組水平。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：1．TNF．a(chǎn)激活的星形膠質(zhì)細(xì)胞可誘導(dǎo)大鼠癲癇發(fā)作。2．SS、GABA及NMDA表達(dá)的變化可能與癲癇發(fā)作有關(guān)。為了進(jìn)一步探討星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌的TNF．a(chǎn)在癲癇發(fā)病中的作用，我們將TNF．n反義寡核苷酸探針作用于分離純化的星形膠質(zhì)細(xì)胞后16．18h，再用馬桑內(nèi)酯(CoriariaLactone，CL)刺激2h，更換培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，再分時(shí)段提取培養(yǎng)液。然后，
5、我們將上述培養(yǎng)基提取液注入正常SD大鼠側(cè)腦室，觀察動(dòng)物行為的變化；并用免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)大腦皮質(zhì)與海馬中SS、GABA與NMDARl表達(dá)水平的改變。結(jié)果：①側(cè)腦室注射此培養(yǎng)液后，大鼠無(wú)癲癇樣行為發(fā)生：②免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果表明：大鼠大腦前梨狀皮質(zhì)和海馬SS、GABA及NMDARl免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)和平均光密度值與對(duì)照組無(wú)顯著性差異。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：TNF-a反義寡核苷酸阻斷后CL刺激的星形膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)液不能誘導(dǎo)大鼠癲癇發(fā)作，星形膠質(zhì)細(xì)胞在癲癇發(fā)、／病中的作用可能主要是由TNF-n來(lái)介導(dǎo)的。／√綜上所述，TNF．n是一種多源性、多效性的細(xì)胞因子，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)，
6、星形膠質(zhì)細(xì)胞既是其主要來(lái)源，也是其作用的重要靶細(xì)胞。星形膠質(zhì)細(xì)胞在TNF．a(chǎn)作用下，激活并釋放一些重要的神經(jīng)活性物質(zhì)，如TNF．n、NO、Olu等，它們作用于不問(wèn)的神經(jīng)元，使其華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文ss及NMDARI的表達(dá)增高，同時(shí)GABA的表達(dá)降低。這樣導(dǎo)致神經(jīng)元的興奮和抑制的失衡，從而導(dǎo)致癲癇的發(fā)作。關(guān)鍵詞星形膠質(zhì)細(xì)胞癲癇．TNF-a，SS／GABANMDARllII華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文TheRoleofTNF-aproducedbyActivatedAstrocytesinEpileptogenesisMasteralCandidateP
7、engjunzhongTutorzhnjiaxiangProf．DepartmentofAnatomy,TongiiMeScalcollegeofHuaZhonguniversityofScienceandTechnology,Wuhan430030ABsTRACTEpilepsyisacommondiseasethatseriouslythreatensthehumanbeings．Duringitsgenesisanddevelopment，thereareapparentabnormalityofastrocytesinmorpho
