溫自家抗體的血清學檢測

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1、溫自家抗體的血清學檢測北京市紅十字血液中心范道旺溶血性貧血的分類自家免疫性溶血性貧血藥物誘導免疫性溶血性貧血同種免疫引起的免疫性溶血性貧血新生兒溶血溶血性輸血反應自家免疫性溶血性貧血溶血類型：所占比例（%）溫自家溶血性貧血（WAIHA）48~70冷凝集素?。–HD)16~32混合型（即溫型和冷型并發(fā)）7~8突發(fā)性冷型血紅蛋白尿癥（PCH)2，主要見于兒童DAT-陰性溶血性貧血12~18免疫性溶血性貧血血清學特征WAIHACHD混合AIHAPCH藥物誘導占有率48~70%16~32%7~8%2%，主要兒童12~18%DATIg

2、G:單純C3IgG+C3單純C3IgG20~60%91~98%71~100%94~100%94%IgG+C3IgG+C324~63%6%C3:7~14%抗體類型主要IgGIgMIgG,IgMIgGIgG放散液IgG無IgG無IgG特異性主要是Rh主要抗-I抗-P系統(tǒng)抗體不同AIHA患者DAT反應特征DATIgGC3血清特征放散液特征WAIHA++57%有IgG自家抗體有IgG,與正常細胞反應+00+CHD0+存在IgM自家抗體無反應活性檢測溫自身抗體的目的用于確定：是否有溫自身抗體致敏在患者自身紅細胞上患者血清中是否存在溫自

3、身抗體患者血清中是否同時存在同種抗體據報道：15~40%的有免疫史的WAIHA患者血清中伴隨有同種抗體。溫自身抗體引發(fā)的血清學問題ABO定型Rh定型DAT試驗抗體篩查及抗體鑒定自身抗體的評價同種抗體的篩查和鑒定自家凝集導致的ABO正反定型不相符正定（抗體血清）反定（試劑紅細胞）抗-A抗-B抗-D陰性對照A細胞B細胞w+w+3+w+4+4+對于極端的個例，包被了大量的IgG抗體紅細胞在定型血清中會發(fā)生自發(fā)的凝集，使用試劑的稀釋液作為陰性對照，可以發(fā)現出現弱的自發(fā)凝集產生的陽性反應，從而干擾定型。一般而言，由于溫自身抗體屬于不完

4、全抗體，即使包被大量此抗體的紅細胞，正定型時與抗-A或抗-B混合后，也不會自發(fā)凝集。同樣，反定型時血清中的溫自身抗體和反定型紅細胞在室溫鹽水介質也不產生凝集反應。WAIHA患者的Rh定型由于鹽水介質抗-D試劑中添加了增強劑，因此，容易導致包被溫自身抗體的D（-）紅細胞自發(fā)凝集，產生假陽性，因此必須要用試劑廠商的試劑稀釋液做陰性對照。只有陰性對照為陰性時結果才可靠(在訂購試劑時要含有陰性對照）。紅細胞包被的IgG抗體不能通過洗滌而除去，因此，為了準確定型，必須采用放散的方法來除去包被在紅細胞上的IgG抗體，得到DAT陰性的紅細

5、胞來定型。DAT陰性紅細胞的制備甘氨酸-EDTA法二磷酸氯喹法甘氨酸-EDTA法去除IgG抗體（1）試劑：10%Na2EDTA0.1M甘氨酸-HCl緩沖液（pH1.5):0.75g甘氨酸溶于100ml生理鹽水，用濃鹽酸調節(jié)pH到1.51.0MTris-NaCl:12.1gtris和5.25gNaCl溶于100ml蒸餾水。甘氨酸-EDTA法去除IgG抗體（2）方法：待處理紅細胞鹽水洗滌6次酸化-甘氨酸-EDTA液：甘氨酸-HCl和EDTA按照20：5的體積比混合。在試管中將紅細胞和酸化-甘氨酸-EDTA液按照10：20體積比充

6、分混合，室溫孵育2~3分鐘。向試管中添加1體積的Tris-NaCl,混勻后于900-1000g離心1分鐘，棄上清液，鹽水洗滌紅細胞4次。用抗-IgG檢測洗滌后的紅細胞，確認DAT陰性，表明包被在紅細胞上的IgG抗體已經去除。氯喹放散法（1）試劑：二磷酸氯喹：20g二磷酸氯喹溶于100ml鹽水，用1NNaOH調節(jié)pH到5.1。DAT陽性的紅細胞（包被IgG）對照細胞（已知部分血型）抗-IgG血清氯喹放散法（2）方法：0.2ml鹽水洗滌的壓積紅細胞和0.8ml氯喹液混合。室溫放置30分鐘。同時做對照。取出部分細胞，鹽水洗滌4次，

7、進行DAT試驗，如果DAT為陰性，則放散完成，將全部處理后的細胞洗滌備用。否則繼續(xù)處理30分鐘后檢測。WAIHA的DAT單純IgG抗體引起20~66%IgG+C324~63%單純C37~14%極少數：IgA或溫反應性IgM抗體溫自身抗體DAT反應結果多特異性AHG3+~4+抗-IgG3+~4+抗-C30~3+陰性對照0溫自身抗體的篩選反應格局鹽水立即離心37℃IATI000～4+II000～4+WAIHA的抗體篩查及抗體鑒定患者的病歷信息分析產生DAT陽性的原因只有自家抗體（無免疫史）自家抗體可能合并同種抗體（有免疫史）藥物

8、抗體（治療用藥情況）患者的病歷信息臨床診斷原發(fā)性：無任何關聯(lián)疾病的情形下發(fā)生繼發(fā)性：其他疾病相合并發(fā)生：如淋巴瘤、慢性淋巴細胞白血病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、其他自家免疫疾病、卵巢腫瘤以及其他慢性炎癥。治療所用藥物有好幾種藥物可以誘導產生和WAIHA一樣的血清學反應。如：甲基多巴和甲基芐肼。免疫史