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《課件-法醫(yī)病理學(xué)-組織切片制作》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、法醫(yī)病理學(xué) 組織切片制作HE染色切片一、目的要求掌握取材、固定、水洗、脫水、透明、浸蠟與包埋，切片制作。（一）取材1.取材快，新鮮，防止組織腐敗。2.取材刀鋒利，垂直地切取，嚴(yán)禁擠壓或用鉗鑷鉗夾，以免使組織或細(xì)胞變形造成人為的破壞。3.取材大小，lcm～3cm×1cm～2cm×0.3cm～0.5cm。材料過(guò)大在短時(shí)間內(nèi)不易固定透，影響效果。（二）方法：1.實(shí)質(zhì)器官心臟：心房、瓣膜、心室?？煞謩e取病變部位帶正常組織?？蓡为?dú)取心室肌，乳頭肌，3～5塊。肺臟：左右兩肺（五個(gè)肺葉）；可根據(jù)病變需要決定取材塊數(shù)，特殊情況下為區(qū)別在不同肺葉上取材，可用形狀做
2、標(biāo)志在記錄時(shí)記清楚，5～7塊。腎臟：取材包括被膜、皮質(zhì)、髓質(zhì)和腎盂，應(yīng)區(qū)別左右腎，2～4塊。胰腺：取胰體部，必要時(shí)加取胰頭、胰尾，2塊。肝臟：取長(zhǎng)方形或三角形，2～3塊。脾臟：取材帶被膜，2～3塊。腦：全腦（橋腦、延腦、小腦）、脊髓頸段及脈絡(luò)叢，十一塊，或根據(jù)具體情況決定：①額極；②前后中央回；③海馬；④內(nèi)囊；⑤丘腦；⑥枕葉；⑦脈絡(luò)叢；⑧橋腦；⑨延髓；⑩中腦；?小腦。取材時(shí)要帶上軟腦膜、腦室膜或軟脊膜因此刀要鋒利。需要時(shí)取脊髓。垂體：前、中、后葉和垂體柄，從前向后橫切。2．管腔臟器：取材時(shí)注意方向，取管腔臟器的全層構(gòu)造。大腸、小腸：應(yīng)考慮環(huán)行皺襞，
3、沿腸管的長(zhǎng)軸取（縱切）。食管、氣管：橫切面為宜。胃：常規(guī)取胃底。取材后應(yīng)將被膜面鋪在濾紙上，然后入固定液內(nèi)，防止或減少組織受壓變形與收縮。有病變的部位，應(yīng)附帶周圍正常組織取材。二、固定（一）意義：是做好切片的重要步驟之一，如果首次組織固定不良，再重新固定效果不佳。檢材固定的關(guān)鍵：取材后盡可能地及時(shí)地將所取的材料進(jìn)行固定，以防止其“死后”變化的進(jìn)展，盡力使組織接近于生前狀態(tài)。為了防止組織結(jié)構(gòu)及成份的破壞和溶解消失，需要使其轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，有利于組織結(jié)構(gòu)保存--固定的基本意義。固定的目的：1.阻止死后變化，防止組織的自溶與腐敗。2．保存組織的結(jié)構(gòu)及成
4、份。3．媒染作用，使不同的組織成份對(duì)染料有不同親和力，使細(xì)胞各部易于受色。4．能使組織硬化，為制作薄切片奠定基礎(chǔ)。注意：材料塊不能過(guò)大，固定器皿不易過(guò)小，固定液量不易過(guò)少，應(yīng)是固定材料體積的20一30倍。（二）固定液：根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康牟煌x擇不同種類固定液，如糖原檢查：不含水的固定液；電鏡檢查：鋨酸固定液等；HE染色：甲醛。固定液：用以固定組織的藥劑。固定液分類：?jiǎn)渭児潭ㄒ?，由一種藥劑組成；混合固定液（或復(fù)合），由二種以上的藥劑組成。1．選擇固定液的標(biāo)準(zhǔn)：①具有強(qiáng)的穿透力，固定均勻，能迅速滲透到組織內(nèi)部使組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)保持生活狀態(tài)。②不使組織過(guò)度收縮與膨
5、脹而變形。③能迅速使組織中的蛋白質(zhì)、糖、脂肪等物質(zhì)凝固成為不溶性物質(zhì)。④使組織達(dá)到一定的硬度便于切片制作。⑤價(jià)格便宜，易購(gòu)買，配制方便。2．單純固定液乙醇（酒精）、甲醛（福爾馬林）、重鉻酸鉀、苦味酸、鋨酸、丙酮、冰醋酸（1）乙醇（酒精）（alcohol）優(yōu)點(diǎn)：①價(jià)格低，易購(gòu)買，易溶于水，使用方便，95％濃度，無(wú)水乙醇100％；②市售有兩種：100%；95%；③能硬化組織起固定作用；④也是一種最常用的脫水劑。固定用濃度在70％～80％，酒精濃度愈大組織收縮愈嚴(yán)重，濃度過(guò)低起不到固定作用。缺點(diǎn)：①穿透力小，由于被固定的組織表面硬化，固定液不容易滲透到組
6、織中去，所以用乙醇固定的組織材料要小。②使組織嚴(yán)重收縮。③由于酒精能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，核蛋白的沉淀物易溶于水，使細(xì)胞核核色不佳。。④溶解脂肪、血紅蛋白和多種色素，脂肪染色必須制作冰凍切片。2．甲醛：（福爾馬林）（formalin）最常用的固定液，一種還原劑，無(wú)色透明極易揮發(fā)有強(qiáng)烈刺激性氣味的液體，不能與氧化劑混使用?？蓱?yīng)用于組織學(xué)、組織化學(xué)、免疫組織化學(xué)等染色，最好用時(shí)現(xiàn)配。商品甲醛：37％～40％甲醛水溶液。固定液的濃度：4％～8％（習(xí)慣上稱為10％或20％的福爾馬林）。固定時(shí)間：常溫下固定24h～48h?？焖俟潭ǎ杉訙氐?0℃～80
7、℃或者加溫煮沸10min即可?？焖俟潭?，組織塊不宜過(guò)厚或過(guò)大，缺點(diǎn)是組織收縮較嚴(yán)重。固定液配制：甲醛1份與9份自來(lái)水混合即為10％（4%）濃度的甲醛固定液。優(yōu)點(diǎn)：①滲透力較強(qiáng)；②組織收縮小；③細(xì)胞核染色較好。缺點(diǎn)：①質(zhì)量較差的formalin在低溫下久存容易產(chǎn)生一種白色的沉淀物稱“三聚甲醛”（付醛），經(jīng)氧化成為甲酸而使溶液呈酸性，影響細(xì)胞核染色。可在備用甲醛溶液中放入適量的碳酸鈣或碳酸鎂，簡(jiǎn)便的辦法可在溶液中投入適量的大理石或者白色粉筆作為中和劑。②酸性福爾馬林固定的組織多易產(chǎn)生一種褐色或黑色細(xì)顆粒狀物，稱為福爾馬林色素，在切片上形成黑色小顆粒，不
8、溶于水和酒精，影響染色效果和切片的觀察。去掉福爾馬林色素顆粒方法：①Schridde法25％氨水lml75％酒精200ml
