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《小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞(BMDC)的培養(yǎng)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞(BMDC)的培養(yǎng)主要目次【經(jīng)典的BMDC制備方法簡圖】---------------------------------------------1【BMDC培養(yǎng)的發(fā)展簡史】---------------------------------------------------2【經(jīng)典的BMDC培養(yǎng)法】-Inaba法(改良)----------------------------------4【BMDC大量制備法】-Son法----------------------------------------------
2、---6【BMDC大量制備法】-Lutz法------------------------------------------------7【注意事項(xiàng)】----------------------------------------------------------------------9摘自文獻(xiàn)InabaK,etal.JExp.Med.1992;176(6):1693-702[3]詳情請致電授權(quán)經(jīng)銷商——杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司中國杭州拱墅區(qū)祥園路108號(hào)智慧信息產(chǎn)業(yè)園三期3號(hào)樓13層全國免費(fèi)客服電話：400-6721-60
3、0郵箱：service@liankebio.com【經(jīng)典的BMDC制備方法簡圖】誘導(dǎo)分化再鋪板完全成熟BoneMarrowImmatureDCMatureDC第2d和第4d3/4量換液，并補(bǔ)加足量GM‐CSF和IL‐40d2d4d6d8d10d獲得成熟的BMDC1.小鼠斷頸處死，取股骨和脛收集DC，重新鋪板，加入以下任意一種成熟誘骨；以促進(jìn)DC更成熟導(dǎo)劑：2.分離骨髓并溶血；1.rmTNF‐?(25‐50ng/ml)3.加入rmGM‐CSF(25ng/ml)2.LPS(1?g/ml)和rmIL‐4(10ng)培養(yǎng)。3.rmCD40L(
4、1?g/ml)【前言】C是“DendriticCells”的縮寫，中文全稱為“樹突狀細(xì)胞”，因其成熟時(shí)伸出許多樹突樣或偽足樣突起而得名。DC是由2011年諾貝爾獎(jiǎng)獲得者、加拿大D籍科學(xué)家RalphM.Steinman于1973年發(fā)現(xiàn)的[1]，是目前發(fā)現(xiàn)的功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞(AntigenPresentingCells,APC)。已證實(shí)，DC是唯一能夠顯著刺激初始T細(xì)胞(Na?veTcells)增殖的APC，而其它種類的APC(如單核巨噬細(xì)胞，B細(xì)胞等)僅能刺激已活化的或記憶性的T細(xì)胞，因此DC是機(jī)體適應(yīng)性T細(xì)胞免疫應(yīng)答的始動(dòng)者，在
5、腫瘤免疫中也發(fā)揮著極其重要的作用。雖然DC存在于體內(nèi)多種組織中，但含量很少，無法滿足科學(xué)研究和臨床治療的需要，所以人們嘗試多種方法來體外培養(yǎng)和擴(kuò)增DC。對于人，最常用的方法是從人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)誘導(dǎo)DC的產(chǎn)生。而對于小鼠，最常見的方法是從骨髓細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生DC，即骨髓來源的DC(BoneMarrow-DerivedDendriticCells，BMDC)。鑒于功能分析和分子生物學(xué)研究的需要，獲得更高數(shù)量和更高純度的BMDC是大家一直追求的目標(biāo)，本文將與大家分享BMDC的經(jīng)典制備方法和大量制備法，大家可根據(jù)自身1詳情請致電授權(quán)
6、經(jīng)銷商——杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司中國杭州拱墅區(qū)祥園路108號(hào)智慧信息產(chǎn)業(yè)園三期3號(hào)樓13層全國免費(fèi)客服電話：400-6721-600郵箱：service@liankebio.com需要選擇使用。另外，我們還備有實(shí)用的BMDC培養(yǎng)操作視頻(內(nèi)部交流，非商用)，因文件比較大，若需要，可通過我們的企業(yè)QQ(號(hào)碼為：800053055)向我們索取發(fā)送?！綛MDC培養(yǎng)的發(fā)展簡史】1973年---加拿大籍科學(xué)家RaplphM.Steinman在美國洛克菲勒大學(xué)(RockefellerUniversity)工作時(shí)從小鼠外周淋巴器官(脾、淋巴結(jié)
7、和派氏集合淋巴結(jié))中首次鑒定出樹突狀細(xì)胞(DendriticCells,DC)[1]。Steinman也因此獲得了2011年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。1992年---日本京都大學(xué)(KyotoUniversity)的Inaba在添加GM-CSF(粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞集落刺激因子)的情況下，分別成功從小鼠血液和骨髓細(xì)胞體外誘導(dǎo)出大量的DC[2,3]。因此，Inaba被認(rèn)為是小鼠DC體外培養(yǎng)的創(chuàng)立者，且Inaba法被稱為小鼠BMDC培養(yǎng)的經(jīng)典方法。1.這些工作均是在RalphM.Steinman的參與下完成的；2.Inaba培養(yǎng)的BMDC來源于小鼠
8、股骨和脛骨中的骨髓；3.Inaba先用抗體+補(bǔ)體法去除骨髓中的淋巴細(xì)胞，以防淋巴細(xì)胞對BMDC培養(yǎng)的影響；4.在誘導(dǎo)分化過程中，為防止粒細(xì)胞的干擾，Inaba通過每2天輕搖培養(yǎng)板并3/4體積換液的方法來盡量去除粒細(xì)胞；5
