紅蔥黃酮、紅蔥甲素提取與測(cè)定

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1、黃酮提取方法：1材料與方法1.1材料①紅蔥。②試劑：95%乙醇；甲醇CP；三氯化鋁CP；鹽酸CP；氨水CP；正丁醇CP；冰乙酸CP；乙醇乙酯CP；蘆丁對(duì)照品（中國(guó)生物制品檢定所）。③儀器設(shè)備：紫外線分光光度計(jì)；DZF-150小型真空恒溫干燥箱；離心機(jī)；ZF-I型三用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠)。1.2方法1.2.1工藝流程洋蔥中總黃酮提取工藝流程。新鮮紅蔥-----去皮------清洗-----加水打漿------浸提-----四層紗布過(guò)濾-----真空抽慮-----黃酮提取物-------大孔吸附樹(shù)脂吸

2、附------解析-----旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)----冷凍干燥---總黃酮。（該方法為大量、高精度提取方法）1.2.2操作步驟新鮮紅蔥，切碎，烘干，取50g，置于大的燒杯中，加蒸餾水煮沸3h。冷卻后進(jìn)行粗濾，對(duì)濾渣用上述方法進(jìn)行再浸取2次，將3次濾液合并，濾液用高速離心機(jī)分離15min，1500r/min。并進(jìn)行加熱濃縮（加熱溫度在85℃左右）。濃縮冷卻后加入等體積95%乙醇，放入冰箱內(nèi)2h。用高速離心機(jī)進(jìn)行分離15min，1500r/min。過(guò)濾得濾液濾渣，棄去濾渣。對(duì)濾液進(jìn)行蒸發(fā)濃縮（加熱溫度在85℃左右）。待乙醇

3、蒸發(fā)完后，將濃液置于真空干燥箱中干燥成疏松固體，粉碎得終產(chǎn)物。（實(shí)驗(yàn)室少量提取法）1.3總黃酮的含量測(cè)定1.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：1.3.1.1蘆丁對(duì)照品溶液的制備：精密稱取120℃干燥恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10mg，加80%乙醇置水浴加熱溶解，冷卻，定容至25mL容量瓶中，即為0.4mg/mL的蘆丁對(duì)照品溶液，搖勻，備用。1.3.1.2最大吸收波長(zhǎng)的選擇：精密吸取0.4mg的蘆丁對(duì)照品溶液lmL置于25mL的容量瓶中，加5%亞硝酸鈉0.75mL，放置6min后，加10%硝酸鋁0.75mL，放置6min，再加4%的

4、氫氧化鈉10mL，加蒸餾水至刻度，搖勻，放置15min，以空白試劑作對(duì)照，用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，確定最大吸收波長(zhǎng)。1.3.1.3蘆丁標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制：精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.0，0.5，1.0，1.5，2.0，3.0mL，分別置于25mL容量瓶中，加5%亞硝酸鈉0.75mL，放置6min后，加10%硝酸鋁0.75mL，放置6min，再加4%的氫氧化鈉10mL，加水至刻度，搖勻，放置15min。以第一管為空白。，在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，以吸光度值為橫坐標(biāo)，蘆丁對(duì)照品溶液濃度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

5、。1.3.2提取物含量的測(cè)定：精密稱定提取物1.5g，置索氏提取器中，加95%乙醇回流至無(wú)色（6～8h），將提取液置于燒杯中，沸水浴加熱濃縮至干，再用熱水洗滌3次，將洗液移至分液漏斗中，并加無(wú)水正丁醇液萃取3~5次，10mL/次。合并萃取液于燒杯中，沸水浴蒸干，再加95%乙醇使其溶解，并移于50ml容量瓶中，再加95%乙醇至刻度，搖勻。精密量取10ml于50ml容量瓶中，加95%乙醇至刻度，搖勻，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備操作測(cè)定吸光度。1.3.3紅蔥黃酮的定性檢測(cè)：①紫外光下呈色反應(yīng)：取該樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，在可見(jiàn)光

6、下呈灰黃色，在紫外光下呈灰褐色并有熒光斑點(diǎn)。②濃氨水反應(yīng)：取該樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，將濾紙?jiān)诎彼戏窖?0s，立即在紫外光下觀察，呈極明顯的黃褐色熒光斑點(diǎn)。③三氯化鋁反應(yīng)：取樣品溶液10μl點(diǎn)在濾紙上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5為展開(kāi)劑，上行展開(kāi)5h，取出晾干。噴1%氯化鋁乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可見(jiàn)熒光斑點(diǎn)。④乙酸鎂反應(yīng)：取樣品溶液點(diǎn)在濾紙上，滴加1%乙酸鎂甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黃色斑點(diǎn)。⑤鹽酸鎂粉反應(yīng)：取乙醇提取液1ml于試管中加鎂粉，再加入濃的鹽酸數(shù)滴（1次加入），在泡沫處呈紫紅色。紅蔥甲素方

7、法1材料與試劑1.1材料：新鮮紅蔥(60℃以下烘干3～5h，粉碎，粒度≤1mm)1.2試劑：紅蔥甲素標(biāo)準(zhǔn)品；甲醇；四氯化碳；氯仿；石油醚；3，5-二硝基苯；甲酸；氫氧化鉀；所用試劑都為分析純。柱層析硅膠(100~200目)、(200~300目)、薄層層析硅膠板GF254(20×20cm)。Kedde’s試劑的配制：A：1%3，5-二硝基苯甲酸的甲醇溶液B：10%氫氧化鉀甲醇溶液按A:B＝3:1現(xiàn)用現(xiàn)配，噴霧使用。1.3儀器：三用紫外分析儀，HP1100高效液相色譜儀。2試驗(yàn)方法2.1紅蔥甲素高含量粗提物的制備

8、方法2.1.1浸提溶劑的選擇(選擇最優(yōu)的浸提劑）取新鮮紅蔥15g加入圓底燒瓶中，分別用溶劑(50%甲醇、70%甲醇、甲醇、95%乙醇、水)浸泡回流提取(60ml×3，5h)，過(guò)濾，合并濾液，濃縮得到醇浸膏，加入等量的水，混合成懸浮液，再用氯仿30mL×3萃取，合并氯仿液，用無(wú)水硫酸鈉干燥后濃縮，得氯仿浸膏A1~A5。氯仿浸膏直接用甲醇∶水＝80∶20的混合溶劑定容至10mL，用高效液相色譜分析含量。