豬圓環(huán)病毒病2型滅活疫苗(LG株)工藝規(guī)程

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1、編號(hào):SC-TS-02-218豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗（LG株）工藝規(guī)程上海海利生物藥品有限公司工藝規(guī)程生產(chǎn)管理上海海利生物藥品有限公司編號(hào):SC-TS-02-218生效日:1/16頁標(biāo)題:豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗（LG株）工藝規(guī)程起草?:起草日期?:部門審核?:審核日期?:QA審核?:審核日期?:批準(zhǔn)?:批準(zhǔn)日期?:分發(fā)部門?:質(zhì)管部、技術(shù)研發(fā)部、生產(chǎn)部目錄1.主題內(nèi)容22.適用范圍23.引用標(biāo)準(zhǔn)24.規(guī)程內(nèi)容24.1品名24.2劑型24.3規(guī)格24.4菌（毒）種24.5批準(zhǔn)文號(hào)24.6工藝流程圖24.7質(zhì)量控制點(diǎn)

2、44.8活性物質(zhì)制備工藝過程44.9活性物質(zhì)生產(chǎn)技術(shù)經(jīng)濟(jì)指標(biāo)和原料利用率計(jì)算74.10油乳劑滅活疫苗制造工藝過程74.11油乳劑劑制造技術(shù)經(jīng)濟(jì)指標(biāo)94.12設(shè)備一覽表104.13生物安全及勞動(dòng)保護(hù)104.14物料114.15成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)134.16貯藏和有效期144.17包裝材料要求144.18標(biāo)簽、說明書15題目?:豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗（LG株）工藝規(guī)程編號(hào):SC-TS-02-2182/16頁1.主題內(nèi)容本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗（LG株）達(dá)到的技術(shù)要求。2.適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗（

3、LG株）3.引用標(biāo)準(zhǔn)國家標(biāo)準(zhǔn)(豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗（LG株）制造及檢驗(yàn)試行規(guī)程)。4.規(guī)程內(nèi)容4.1品名通用名稱：豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)英文名：PorcineCircovirusType2Vaccine,Inacitvated（StrainLG）漢語拼音：ZhuYuanhuanbingduErxingMiehuoyimiao(LGZhu)4.2劑型水包油劑型4.3規(guī)格20ml/瓶、40ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶4.4菌（毒）種1.來源：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)生物研究所保存2.毒株：豬圓

4、環(huán)病毒LG株3.代次：56～60代4.保存溫度：-80℃以下保存4.5批準(zhǔn)文號(hào)獸藥生字（2010）0902010714.6工藝流程圖豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗（LG株）工藝流程圖生產(chǎn)用PK-15細(xì)胞棄液并加入胰蛋白酶，消化細(xì)胞加入DMEM液，分散細(xì)胞分裝，取樣檢測轉(zhuǎn)瓶制備成細(xì)胞懸液﹡轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)同步接種毒﹡36~48h，換維持液﹡細(xì)胞病變達(dá)70～80%﹡收獲﹡半成品檢測分裝滅活檢驗(yàn)*滅活合格抗原說明書、紙箱標(biāo)簽成品檢驗(yàn)入庫貼簽軋蓋乳化*反復(fù)凍融3次裝箱百級(jí)區(qū)萬級(jí)區(qū)帶﹡項(xiàng)為質(zhì)量控制點(diǎn)十萬級(jí)區(qū)題目?:豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗（

5、LG株）工藝規(guī)程編號(hào):SC-TS-02-2184/16頁4.5質(zhì)量控制點(diǎn)工序名稱控制項(xiàng)目控制標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞消化消化液0.125%胰蛋白酶+0.01EDTA溶液；50-100mL/轉(zhuǎn)瓶消化溫度37℃消化時(shí)間轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)瓶，待細(xì)胞層開始出現(xiàn)裂縫時(shí)終止，一般為45秒轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)溫度37℃恒溫室的控制時(shí)間細(xì)胞生長成單層即可結(jié)束培養(yǎng)，一般為24小時(shí)左右轉(zhuǎn)速轉(zhuǎn)瓶機(jī)設(shè)置為10～12轉(zhuǎn)/小時(shí)接毒接種量無菌控制下接種，5%無菌檢測取樣，T.G、G.P、G.A培養(yǎng)基培養(yǎng)應(yīng)無菌調(diào)PH值PH值2日后，無菌，7.5%碳酸氫鈉調(diào)PH為7.2觀察細(xì)胞病變情況

6、出現(xiàn)混濁，可能污染，棄去。細(xì)胞病變達(dá)70%~80%時(shí)收獲收獲無菌無菌控制下操作，不污染滅活滅活劑0.2%的甲醛滅活溫度調(diào)整滅活罐的溫度為37℃滅活時(shí)間滅活充分，維持24小時(shí)乳化水相、油相比例保證抗原含量并不分層，水相：油相為9:1乳化時(shí)間30分鐘乳化溫度0～10℃4.6活性物質(zhì)制備工藝過程4.8.1PK-15細(xì)胞系標(biāo)準(zhǔn)：1.細(xì)胞形態(tài)：用含10%的小牛血清的MEM培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，置37℃、含5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2～3小時(shí)可貼壁，培養(yǎng)48小時(shí)應(yīng)在1/2以上的瓶面出現(xiàn)細(xì)胞島，并有部分相連、鏡檢時(shí)細(xì)胞形態(tài)是橢圓形或梭

7、狀上皮細(xì)胞，明朗、輪廓清晰、胞漿內(nèi)可見小顆粒，72～96小時(shí)形成單層。2.細(xì)胞純凈性：應(yīng)無菌、無霉菌、無支原體、無外源病毒污染。3.細(xì)胞致瘤性檢驗(yàn)：不致瘤。4.細(xì)胞核學(xué)檢查：不同代次的細(xì)胞與基礎(chǔ)細(xì)胞庫的細(xì)胞相比，所有細(xì)胞的染色體模式數(shù)不得高出15%，核型必須相同。5.制苗的細(xì)胞代次：第20～40代之間。6.細(xì)胞保存：液氮保存，保存期為36個(gè)月。4.8.2生產(chǎn)用毒種要求u病毒含量：每毫升病毒含量應(yīng)不低于105.5TCID50u純凈性：病毒應(yīng)無題目?:豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗（LG株）工藝規(guī)程編號(hào):SC-TS-02-2

8、185/16頁細(xì)菌霉菌支原體其它外源病毒u特異性與PCV2陽性血清中和后接種PK15細(xì)胞，中和細(xì)胞孔IPMA檢測無明顯著色反應(yīng)，病毒對(duì)照孔呈棕紅色染色。u毒種保存與毒種繼代1）在-20℃以下保存，應(yīng)不超過1年。2）繼代應(yīng)不超過3代。4.8.3細(xì)胞的傳代?工藝過程選生長2—3天已形成致密單層的細(xì)胞種按常規(guī)法進(jìn)行細(xì)胞分散，37℃培養(yǎng)，2～3天傳代一次。傳代細(xì)胞傳代時(shí)的分種率一