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《臨床PCR試劑盒的選用和質(zhì)檢80》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心李金明PCR或RT-PCR試劑盒的組成?核酸提取試劑?核酸擴(kuò)增或逆轉(zhuǎn)錄-核酸擴(kuò)增試劑?產(chǎn)物檢測試劑?有些使用全自動(dòng)分析儀的PCR方法因其核酸擴(kuò)增和檢測同時(shí)完成?故無專門的產(chǎn)物檢測試劑?影響PCR試劑盒質(zhì)量的因素?內(nèi)在因素:原材料、核酸提取方法、方法學(xué)設(shè)計(jì)PCR?寡核苷酸引物和探針?緩沖液和dNTP?聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶等PCR反應(yīng)混合物2+和MgTaqDNA多聚酶或2+Mn和rTthDNA多聚酶dCTAmpErasPdGTePdUT生物素標(biāo)記的引P物dATP寡核苷酸引物和探針?其對(duì)試劑盒質(zhì)量的影響首先是純度。純度的判斷可根據(jù)260/280吸光度比值來判斷?如?2.0?
2、則需重新純化。另一種方法是將其在聚丙烯酰胺凝膠上電泳?如出現(xiàn)一條以上的帶或遷移位置錯(cuò)誤?則需重新純化。?是否有污染。?結(jié)合特異性?濃度?dNTP和緩沖液?dNTP?包括dATP、dCTP、dGTP和dTTP或dUTP?的濃度?緩沖液?在儲(chǔ)存和擴(kuò)增循環(huán)中穩(wěn)定、作為聚合酶活性所必須的Mg???或用于rTth的Mn???的濃度以及pH等逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶?酶的濃度?酶的活性核酸擴(kuò)增方法?PCR?RT?PCR?轉(zhuǎn)錄依賴的擴(kuò)增?TMA??連接酶鏈反應(yīng)?LCR??鏈替代擴(kuò)增?SDA?等PCR?核酸提取的有效性?核酸提取的簡便性PCR?雜交固相?特異探針及其標(biāo)記物影響PCR試劑盒質(zhì)量的因素?
3、內(nèi)在因素:原材料、核酸提取方法、方法學(xué)設(shè)計(jì)?外在因素?試劑盒的運(yùn)輸和貯存外在因素?試劑盒的運(yùn)輸和貯存試劑盒的運(yùn)輸和貯存?PCR試劑盒的有效期一般為6個(gè)月?這是指在適當(dāng)?shù)馁A存溫度下。核酸擴(kuò)增部分的試劑一般要貯存于-20℃下?產(chǎn)物檢測部分試劑則貯存于2?8℃。?試劑盒從廠家到用戶手中?均要經(jīng)歷運(yùn)輸及運(yùn)輸中的貯存?任一環(huán)節(jié)的不當(dāng)?均會(huì)影響試劑盒的臨床使用質(zhì)量。PCR試劑盒的分類?定性測定?PCR-ELISA、PCR-膜上雜交?雜交梳?、熒光PCR?分子信標(biāo)和TaqMan等??定量測定?PCR-ELISA、TaqMan和Amplisensor熒光定量、AmplicorPCR-ELISA定量
4、等。PCR試劑盒的選用原則?參考試劑生產(chǎn)廠家的信息廣告?參考同行對(duì)有關(guān)試劑盒的使用效果?參考有關(guān)機(jī)構(gòu)的綜合評(píng)價(jià)?根據(jù)使用目的?根據(jù)所在實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)特點(diǎn)?根據(jù)所在醫(yī)院患者的承受能力PCR試劑盒的質(zhì)檢?外包裝?廠家名稱、檢測目的、批準(zhǔn)文號(hào)、批號(hào)和有效期等。?內(nèi)包裝?試劑瓶是否漏液、真空包裝是否破損以、試劑是否齊全以及是否有使用說明書等。PCR試劑盒的質(zhì)檢?采用血清?樣本?盤?Panel?質(zhì)檢?PCR試劑血清?樣本?盤由一定數(shù)量的原血清陰、陽性樣本、2?3份純化核酸?DNA或RNA或cDNA?樣本以及3?5份系列稀釋陽性樣本所組成。樣本總數(shù)可定在20份左右。?原血清樣本用于判斷試劑盒對(duì)特
5、定病原體核酸檢出的特異性、靈敏度和符合率?純化核酸樣本用于判斷DNA擴(kuò)增或逆轉(zhuǎn)錄及DNA擴(kuò)增的有效性?系列稀釋陽性樣本用于判斷試劑的測定下限。試劑特異性、靈敏度和符合率計(jì)算公式試劑特異性、靈敏度和符合率計(jì)算公式?靈敏度????(a/a+c)?100%?特異性????(d/b+d)?100%?符合率????(a+d/a+b+c+d)?100%謝謝!K9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ7G4D1z-w*t!qYmVjSgOdLaI6F3B0y)v%s#pXlUiQfNcK8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-w&t!qYmVjRgOdL9I6F3B0y
6、(v%s#oXlUiQfNbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z)w&t!pYmUjRgOcL9I6E3B0y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)w&s!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbJ8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)v&s!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%rZoWlThQeNbJ8G4D1A-w*t$qYnVjSgPdLaI7F3C0y)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!
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