GB13089-1991 飼料中 惡唑烷硫酮的測定方法.pdf

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1、中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)飼料中嗯哇烷硫酮的測定方法GB13089一91Methodfordeterminationofo-sanlidinethioneinfeeds本標(biāo)準(zhǔn)參照采用國際標(biāo)準(zhǔn)ISO5504-1983《含油種子及其去油后餅粕中異硫氛酸醋和嗯哩烷硫酮的測定》。1主題內(nèi)容與適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中嗯哇烷硫酮的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于菜子餅粕和配合飼料中il哇烷硫酮的測定。2原理飼料中的硫葡萄糖昔被硫葡萄搪昔酶(芥子酶EC3.2.3.1)水解，再用乙醚萃取生成的嗯哇烷硫酮，用紫外分光光度計測定。3試荊和溶液除特殊規(guī)定外，本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑均為分析純，水為燕餾水或相應(yīng)

2、純度的水。3.1乙醚:光譜純或分析純。3.2去泡劑:正辛醇(C.H=OH),3.3pH7.0緩沖液:取35.3mL0.1mol/L檸檬酸(C5H807-H,O,HG3-1108)溶液(21.01g/L)于一個200ml,容量瓶中，再用0.2mol/L磷酸氫二鈉(GB1263)溶液調(diào)節(jié)pH至7.0.3.4酶源:用白芥(SinapisalbaL.)種子(72h內(nèi)發(fā)芽率必須大于85%，保存期不得超過兩年)制備。將白芥籽磨細，使80%通過0.28mm孔徑篩子，用正己烷或石油醚(沸程40-60'C)提取其中脂肪，使殘油不大于2%,操作溫度保持30℃以下，放通風(fēng)櫥于室溫下使溶劑

3、揮發(fā)。此酶源置具塞玻璃瓶中4℃下保存，可用6周。4儀器、設(shè)備4.1分析天平:感量0.0001g,4.2樣品篩:孔徑。.28mm.4.3樣品磨。4.4玻璃干燥器。4.5恒溫干燥箱:103士20c,4.6三角燒瓶:25,100,250mL,4.7容量瓶:25,100mL.4.8燒杯:50ml。4.9分液漏斗:50mLo國家技術(shù)監(jiān)督局1991一07一16批準(zhǔn)1992一04一01實施.www.bzxzk.com.GB13089一914門0移液管:2mL.4.11振蕩器:振蕩頻率10。次/min(往復(fù))4.12分光光度汁:有10mm石英比色池，可在200^300nm處測量吸光

4、度。5試樣制備采集具有代表性的樣品至少500g，四分法縮分至50g，再磨細，使其80%能通過。.28mm篩。6測定步驟6.1稱取試樣(菜籽餅粕1.1g，配合飼料5.5g)于事先干燥稱重(精確到。.001g)的燒杯中，放入恒溫干燥箱(4-5)，在103f2℃下烘烤至少8h，取出置干燥器(4-4)中冷至室溫，再稱重，精確到。.001go6.2試樣的酶解將干燥稱重的試樣全倒入一250mL三角燒瓶(4-6)中，加入70mL沸緩沖液(3-3)，并用少許沖洗燒杯，使冷卻至30"C，然后加入。.5g酶源(3-4)和幾滴去泡劑(3-2)，于室溫下振蕩2h。立即將內(nèi)容物定量轉(zhuǎn)移至10

5、0ml_容量瓶(4.7)中，用水洗滌三角燒瓶(4.6)，并稀釋至刻度，過濾至100mL三角燒瓶(4-6)中，濾液備用。6.3試樣測定取上述濾液(菜籽餅粕1.0mL，配合飼料2.0mL)，至50mL分液漏斗(4-9)中，每次用10mL乙醚(3.1)提取兩次，每次小心從上面取出上層乙醚。合并乙醚層于25mL容量瓶(4-7)中，用乙醚(3.1)定容至刻度。從200nm至280nm測定其吸光度值，用最大吸光度值減去280nm處的吸光度值得試樣測定吸光度值A(chǔ)E。6.4試樣空白測定(菜籽餅粕此項免去，A。為零)按6.1,6.2,6.3同樣操作，只加試樣不加酶源(3.4),測得值

6、為試樣空白吸光度值A(chǔ)d,6.5酶源空白測定按6.1,6.2,6.3同樣操作，不加試樣只加酶源<3.4),測得值為酶源空白吸光度值A(chǔ)c了測定結(jié)果了.1計算公式，、行____IA二一A。一AX=(AE一A。一Ac)XCPX25X100X10-'X-二:生‘一一二些‘一二=X20.5刀子刀s式中:X—試樣中P,哇烷硫酮的含量，以每克絕干樣中P,}哇烷硫酮的毫克數(shù)表示;At—試樣測定吸光度值;A}—試樣空白吸光度值;Ac—酶源空白吸光度值;C.p—轉(zhuǎn)換因素，吸光度為1時，每升溶液中p烷硫酮的毫克數(shù)，其值為8.2syn—試樣絕干質(zhì)量+H若試樣測定液經(jīng)過稀釋，計算時應(yīng)予考慮。7

7、.2結(jié)果表示每個試樣取2個平行樣進行測定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。結(jié)果表示到0.01mg/go了.3重復(fù)性同一分析者對同一試樣同時或快速連續(xù)地進行兩次測定，所得結(jié)果之間的差值:在嗯哇烷硫酮含量小于或等于。.20mg/H時，不得超過平均值的20/;.www.bzxzk.com.GB13089一91在嗯哇烷硫酮含量大于0.20mg/g而小于。.50mg/g時，不得超過平均值的15寫;在嗯哇烷硫酮含量等于或大于。.50mg/g時，不得超過平均值的10000附加說明:本標(biāo)準(zhǔn)由全國飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出。本標(biāo)準(zhǔn)由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所負責(zé)起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人李建凡